核轉(zhuǎn)錄因子E47與心肌缺血再灌注誘導(dǎo)心肌纖維化之關(guān)系初探.pdf

1、核轉(zhuǎn)錄因子E47亦稱Transcription Factor-3（TCF-3），是E2A基因編碼的兩個不同的堿性螺旋環(huán)螺旋（basic Helix-Loop-Helix，bHLH）轉(zhuǎn)錄因子（E12和E47）之一。E47以同源或異源二聚體結(jié)合于目的基因上游啟動子的E-box順式作用元件調(diào)節(jié)基因的表達。上皮細胞間質(zhì)轉(zhuǎn)型（epithelial mesenchymal transition，EMT）過程的兩個關(guān)鍵基因E-cadherin和α-S

2、MA的啟動子都含有與E2A轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合的E-box序列，E47可上調(diào)腎小管上皮細胞α-SMA的表達，使腎小管上皮細胞通過EMT轉(zhuǎn)化為肌纖維母細胞，引起腎間質(zhì)纖維化。課題組前期利用轉(zhuǎn)錄因子活性譜芯片發(fā)現(xiàn)，原代培養(yǎng)的新生大鼠心肌細胞缺氧/復(fù)氧（hypoxia reperfusion,H/R）后可引起核轉(zhuǎn)錄因子E47活性明顯上調(diào)。并且前期研究表明，E47在心肌細胞中高表達可引起心肌細胞表型的轉(zhuǎn)變，上調(diào)α-SMA的表達。由于心肌缺血/再灌注損傷

3、終末可引起心肌纖維化，為此，本研究擬在整體水平觀察心肌缺血/再灌注對核轉(zhuǎn)錄因子 E47表達的影響，以及初步探討 E47與心肌缺血/再灌注(Myocardial ischemia reperfusion,I/R)誘導(dǎo)的心肌纖維化的關(guān)系。
　　方法：
　　1、動物模型。結(jié)扎冠狀動脈左前降支建立心肌缺血再灌注模型、心肌缺血再灌注術(shù)后飼養(yǎng)4周長期模型，于術(shù)后不同再灌注時間點取心臟左心室洗凈凍存?zhèn)溆没蛉墓潭ā?br>　　2、蛋白免疫

4、印跡法（Western Blotting）檢測不同時間點E47、α-SMA、α-SCA和cTnT的表達。
　　3、實時定量 PCR（RT-PCR）檢測不同時間點 E47、α-SMA、FSP1、DDR2、Collagen I的表達。
　　4、常規(guī)病理切片，免疫組織化學(xué)檢測E47、α-SMA的表達。
　　5、常規(guī)病理切片，免疫熒光檢測E47的表達。
　　6、常規(guī)病理切片，HE染色，觀察對照組與4周長期模型組的病理變化

5、。
　　7、常規(guī)病理切片，Masson染色，觀察對照組與4周長期模型組的膠原變化。
　　結(jié)果：
　　1、心肌缺血再灌注4周能即可引起心肌纖維化的發(fā)生，HE染色可觀察到明顯的病變，Masson染色可觀察到大量的膠原沉積，計算膠原纖維面積百分比有統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.01）
　　2、心肌缺血再灌注0.5h能引起E47的高表達，而后隨著再灌時間的延長E47表達逐漸降低至正常水平。
　　3、α-SCA、cTnT隨著再

6、灌注時間的延長表達逐漸降低，α-SMA、FSP1、DDR2、Collagen I隨著再灌注時間的延長逐漸升高。
　　結(jié)論：
　　大鼠心肌缺血再灌注4周即可誘導(dǎo)心肌纖維化的發(fā)生；心肌缺血再灌注0.5h可引起核轉(zhuǎn)錄因子E47的短暫瞬時的高表達，并且心肌細胞特異標(biāo)志物α-SCA和cTnT表達下調(diào)，肌成纖維細胞特異標(biāo)志物α-SMA表達上調(diào)，成纖維細胞特異標(biāo)志物FSP1、DDR2、Collagen I增高。提示核轉(zhuǎn)錄因子E47與心肌缺