CCL20-CCR6-Th17軸與肝細(xì)胞癌血管浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移關(guān)系探討.pdf

1、背景和目的：
　　肝細(xì)胞癌（簡(jiǎn)稱肝癌）是我國(guó)常見(jiàn)惡性腫瘤之一，目前仍缺乏有效的治療手段，臨床治療主要以手術(shù)切除為主。肝癌極易發(fā)生肝內(nèi)轉(zhuǎn)移，主要是靜脈血管轉(zhuǎn)移，術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率極高，患者總體5年生存率很低。我們近期的工作發(fā)現(xiàn)，肝癌患者手術(shù)后復(fù)發(fā)的影響因素除肝癌組織本身主要是腫瘤大小因素外，根治性手術(shù)前患者血清中白細(xì)胞介素（IL）17水平的升高與患者術(shù)后不良預(yù)后相關(guān),而IL-17主要由肝組織內(nèi)浸潤(rùn)的Th17細(xì)胞產(chǎn)生。國(guó)內(nèi)外學(xué)者的多個(gè)研究

2、表明：IL-17具有促進(jìn)血管新生而加速腫瘤生長(zhǎng)作用，腫瘤微環(huán)境中有大量Th17細(xì)胞擴(kuò)增。Th17細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中如何募集還不明確，其在腫瘤血管浸潤(rùn)中的作用仍需進(jìn)一步研究。
　　趨化因子是一類分子量為8–14KD的小分子多肽，通過(guò)與細(xì)胞膜表面具有七次跨膜結(jié)構(gòu)域的G蛋白偶聯(lián)受體結(jié)合，對(duì)多種免疫細(xì)胞發(fā)揮趨化作用，在特異性與非特異性免疫應(yīng)答過(guò)程中發(fā)揮重要作用。在生理及病理?xiàng)l件下，趨化因子及其受體的相互作用參與機(jī)體多種生物學(xué)功能。Th17

3、細(xì)胞表達(dá)趨化因子受體CCR6,其可與趨化因子CCL20發(fā)生特異性應(yīng)答反應(yīng)。本課題探究了CCL20/CCR6/Th17軸與肝細(xì)胞癌血管浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。
　　方法：
　　采用SYBR Green實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定人肝細(xì)胞系L-02，及肝癌細(xì)胞系Hep3B，Huh7，和HepG2中CCL20 mRNA的表達(dá)，ELISA檢測(cè)其上清中CCL20蛋白的分泌，采用Transwell遷移實(shí)驗(yàn)分析肝癌細(xì)胞系對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞的趨化作用。

4、采用9-plex Array， ELISA法定量測(cè)定93例肝細(xì)胞癌患者，其中51例發(fā)生血管浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移（轉(zhuǎn)移組），42例無(wú)血管轉(zhuǎn)移（無(wú)轉(zhuǎn)移組）的術(shù)前外周血中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、IL-17、IL-23、IFN-γ，TNF-α和CCL20的血清濃度；應(yīng)用SYBR Green實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)了其中41例患者（轉(zhuǎn)移組20例，無(wú)轉(zhuǎn)移組21例）肝癌癌組織及相應(yīng)癌旁組織中CCL20和CCR6的表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色法

5、檢測(cè)肝癌癌組織、對(duì)應(yīng)癌旁組織及正常人供肝組織CCL20的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　人肝癌細(xì)胞系中CCL20的表達(dá)分泌較正常肝細(xì)胞顯著升高，對(duì)外周血表達(dá)CCR6+的T細(xì)胞具有趨化作用。93例肝細(xì)胞癌患者血清中CCL20的血清濃度相對(duì)于10例肝血管瘤患者顯著升高，其血清CCL20水平與腫瘤大小及血清IL-17水平均呈正相關(guān)。41例肝癌癌組織CCL20 mRNA表達(dá)顯著高于癌旁組織（P<0.001），CCL20主要表達(dá)在肝癌細(xì)胞漿中

6、，浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞也有部分表達(dá)。多因素分析發(fā)現(xiàn)：有血管浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的肝癌患者（轉(zhuǎn)移組）術(shù)前外周血CCL20的水平為36.19(16.42-55.49) pg/ml，顯著高于無(wú)轉(zhuǎn)移組的20.11(13.68-28.39) pg/ml， P<0.05，并且，轉(zhuǎn)移組患者血清IL17濃度為1.10(0.50-1.85) pg/ml，也顯著高于無(wú)轉(zhuǎn)移組的0.20(0.30-0.50) pg/ml， P<0.05。對(duì)41例肝癌組織中CCL20，CCR6基