探尋RNA結(jié)合蛋白QKI在前列腺癌演變過(guò)程中的作用及其分子機(jī)制.pdf

1、前列腺癌(PCa)是在歐美國(guó)家最常見(jiàn)的非皮膚性癌癥,在男性癌癥死亡原因中位居第二。在中國(guó)隨著生活方式的不斷改變前列腺癌的發(fā)病率近年來(lái)也呈現(xiàn)出高增長(zhǎng)的趨勢(shì)[1,2]。目前主要的治療方法是手術(shù)治療,同時(shí)輔助放、化療和內(nèi)分泌治療,治療效果具有局限性。由于前列腺癌具有發(fā)病早期無(wú)明顯癥狀等特點(diǎn),很多患者被確診時(shí)往往已經(jīng)喪失了最佳的手術(shù)時(shí)機(jī)。突破傳統(tǒng)治療手段的局限性成為目前前列腺癌患者治療的新的挑戰(zhàn)。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步,基因治療在越來(lái)越多

2、的臨床疾病診療中得到了利用,其針對(duì)靶點(diǎn)治療和幾乎無(wú)創(chuàng)傷性的特點(diǎn)能夠顯著的改善現(xiàn)有治療手段的不足。因此探尋更多與前列腺癌相關(guān)的基因,針對(duì)這些基因開(kāi)展靶向治療就成為了前列腺癌治療的一個(gè)新方向。
　　現(xiàn)今,RNA結(jié)合蛋白和miRNA已經(jīng)被證實(shí)是細(xì)胞生物學(xué)一個(gè)關(guān)鍵的調(diào)節(jié)點(diǎn),在轉(zhuǎn)錄后調(diào)控著RNA的穩(wěn)定性、轉(zhuǎn)錄效率、轉(zhuǎn)運(yùn)和剪切。mRNA調(diào)節(jié)的缺失也被證實(shí)和許多人類(lèi)疾病密切相關(guān),其中就包括癌癥[3]。RNA結(jié)合蛋白QKI隸屬于STAR家族（ev

3、olutionarily conserved signal transduction and activation of RNA family)是一個(gè)重要的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控因子[4]。多種癌癥相關(guān)基因都是QKI調(diào)控目標(biāo)如:c-fos蛋白[6],p27[7],β-catenin[8],新近研究表明,QKI的異常表達(dá)與人類(lèi)許多腫瘤的發(fā)生和發(fā)展相關(guān)[9,10]。總之,所有這些都指出了QKI在多種腫瘤中的抑制作用。
　　我們的研究是首次在前列腺

4、癌中報(bào)道RNA結(jié)合蛋白QKI的表達(dá)情況,同時(shí)首次報(bào)道了QKI在前列腺癌發(fā)生發(fā)展中所起到的作用。通過(guò)免疫組化、Western blot和qPCR方法在病理組織標(biāo)本中篩查QKI表達(dá)水平以及表達(dá)趨勢(shì)。通過(guò)對(duì)前列腺癌細(xì)胞系的篩選,選取過(guò)表達(dá)慢病毒以及基因沉默慢病毒分別對(duì)QKI的表達(dá)水平進(jìn)行調(diào)整,再與對(duì)照組進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)功能上的比對(duì),以此闡述QKI在前列腺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所起到的作用及其機(jī)制。
　　具體實(shí)驗(yàn)分為以下2個(gè)部分:
　　1

5、)RNA結(jié)合蛋白QKI在前列腺癌組織中的表達(dá)分析
　　實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)前列腺癌組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化、qPCR和western blot以及啟動(dòng)子甲基化等檢測(cè)方法,檢測(cè)結(jié)果表明在前列腺癌組織中 QKI的表達(dá)水平要低于癌旁對(duì)照組織,并且隨著分化程度的不斷減低 QKI的表達(dá)水平也呈現(xiàn)降低狀態(tài)。
　　2)探尋RNA結(jié)合蛋白QKI在前列腺癌中的作用及其機(jī)制
　　實(shí)驗(yàn)選取了三株前列腺癌細(xì)胞株 PC3,DU145,LNCaP并對(duì)這三株細(xì)胞

6、進(jìn)行了QKI表達(dá)水平的篩選,將選取出來(lái)QKI表達(dá)水平最低的PC3細(xì)胞用過(guò)表達(dá)慢病毒感染,將表達(dá)水平相對(duì)較高的DU145細(xì)胞用基因沉默慢病毒感染,并分別構(gòu)建穩(wěn)定感染細(xì)胞系。細(xì)胞模型構(gòu)建成功后我們通過(guò)MTT、平板克隆實(shí)驗(yàn)對(duì)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系的增殖能力進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)QKI能夠明顯的抑制前列腺癌細(xì)胞增殖(P<0.05)。隨后通過(guò)流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞周期和凋亡水平進(jìn)行檢測(cè),發(fā)現(xiàn)QKI可以使前列腺癌細(xì)胞出現(xiàn)G1期阻滯,減少細(xì)胞S期的進(jìn)入,同時(shí)QKI可以使癌細(xì)胞

7、出現(xiàn)早期凋亡的呈倍數(shù)增長(zhǎng)(P<0.01)。在細(xì)胞侵襲能力檢測(cè)中通過(guò)Transwell實(shí)驗(yàn)我們發(fā)現(xiàn)較對(duì)照組來(lái)言QKI可以明顯的降低細(xì)胞侵襲能力(P<0.05)。最后我們?yōu)榱蓑?yàn)證細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中的結(jié)果又進(jìn)行了動(dòng)物實(shí)驗(yàn),在隨機(jī)分組的裸鼠中分別皮下注射了穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 QKI的細(xì)胞系,通過(guò)對(duì)瘤體體積,生長(zhǎng)曲線繪制和瘤體重量的檢測(cè)發(fā)現(xiàn) QKI能夠明顯的抑制腫瘤的生長(zhǎng)。將荷瘤取出后對(duì)瘤體組織進(jìn)行的TUNEL檢測(cè),結(jié)果提示QKI的過(guò)表達(dá)能夠明顯增加腫瘤的凋亡(P