miR-30d通過自噬調(diào)控影響未分化型甲狀腺癌細(xì)胞對(duì)順鉑治療敏感性的研究.pdf

1、目的:研究miR-30d對(duì)未分化型甲狀腺癌(ATC)細(xì)胞順鉑治療敏感性的影響,并探討其內(nèi)在分子機(jī)制。
　　方法:利用miR-30d mimic使miR-30d低表達(dá)的ATC細(xì)胞過表達(dá)miR-30d,采用細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)、藥理學(xué)和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)學(xué)等多種方法研究:1)miR-30d對(duì)細(xì)胞自噬的影響及其內(nèi)在調(diào)控機(jī)制;2)在體外(細(xì)胞水平)和體內(nèi)(動(dòng)物水平)研究miR-30d介導(dǎo)的自噬激活對(duì)化療藥物順鉑治療敏感性的影響。
　　結(jié)果:

2、本研究發(fā)現(xiàn):1)螢光素報(bào)告基因分析證實(shí)beclin1的3’-UTR存在與miR-30d相結(jié)合序列,并可負(fù)性調(diào)控beclin1(一個(gè)自噬相關(guān)基因)的表達(dá)。轉(zhuǎn)染miR-30d mimic后,beclin1的螢光素報(bào)告基因活性、mRNA及蛋白水平均顯著降低;2)miR-30d可抑制順鉑誘導(dǎo)的自噬激活,表現(xiàn)為自噬相關(guān)蛋白LC3 II(microtubule-associated protein1light chain)水平下調(diào)、GFP-LC3熒

3、光顆粒數(shù)減少;3)miR-30d過表達(dá)可增強(qiáng)ATC細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性,表現(xiàn)為細(xì)胞活力減弱、凋亡細(xì)胞數(shù)增加,以及凋亡相關(guān)蛋白cleaved PARP和cleaved Caspase3蛋白表達(dá)上調(diào);4)過表達(dá)beclin1能部分逆轉(zhuǎn)miR-30d引起的自噬水平下調(diào)及凋亡增加,表現(xiàn)為轉(zhuǎn)染beclin1質(zhì)粒后,LC3 II水平上調(diào),cleaved PARP和cleaved Caspase3蛋白表達(dá)下調(diào)以及細(xì)胞凋亡數(shù)減少;5)在接種ATC細(xì)胞移植