碘離子促血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖機(jī)制的研究.pdf

1、目的：研究碘離子（iodide ion，I-）在血管內(nèi)皮細(xì)胞(vascular endothelial cell，VEC)增殖過程中可能的分子機(jī)制，探討下腔靜脈隔膜形成的原因。
　　方法：1.細(xì)胞培養(yǎng):人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞株EA.hy926常規(guī)培養(yǎng)于康寧培養(yǎng)皿中，使用DMEM高糖培養(yǎng)基，加10％胎牛血清。于37℃，5％CO2條件的飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，至細(xì)胞貼壁生長匯合即可傳代，待細(xì)胞生長狀態(tài)穩(wěn)定后進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。2.檢測不同濃

2、度的I-對VEC表達(dá)bcl-2/bax蛋白的影響:根據(jù)I-的終濃度分為空白對照組、100μg/L、300μg/L、500μg/L、1000μg/L，使用免疫印跡技術(shù)(Western Blot)檢測VEC中bcl-2/bax蛋白表達(dá)的情況。3.VEC增殖過程中I-與血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及其受體的關(guān)系:采用CCK-8法檢測I-與VEGF抑制劑作用下VEC的增殖情況

3、，分組為空白對照組、溶媒組、KI組（300μg/LI-）、DMH4+KI組(5μM DMH4、300μg/LI-)、DMH4組（5μM DMH4）;采用Western Blot檢測I-對血管內(nèi)皮生長因子受體-2(vascular endothelial growth factor receptor2，VEGFR-2)磷酸化的影響，其分組根據(jù)I-的終濃度分為空白對照組、100μg/L、300μg/L、500μg/L、1000μg/L。4.

4、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:結(jié)果用SPSS16.0軟件行統(tǒng)計(jì)分析。檢測結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(means±SD)表示。多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.不同濃度的I-對VEC表達(dá)bcl-2/bax蛋白的影響:各濃度I-組與空白對照組分別比較，bcl-2及bax的表達(dá)量均無明顯差別(P＞0.05)，各濃度I-組組間比較也無明顯差別(P＞0.05)，表明I-對凋亡蛋白bcl-2

5、及bax的表達(dá)量無明顯影響。
　　2.I-與VEGF抑制劑作用下VEC的增殖情況:空白對照組與溶媒組VEC增殖率無明顯差異(P＞0.05)，提示DMH4的溶媒DMSO對本實(shí)驗(yàn)無影響;與空白對照組相比，DMH4組VEC的增殖率顯著降低(P＜0.05)，提示DMH4作為一種VEGF抑制劑，通過抑制VEGF的活性，對VEC的增殖產(chǎn)生抑制作用;與空白對照組相比，KI組細(xì)胞增殖率顯著增高（P＜0.05），提示300μg/L的I-環(huán)境中，I-

6、刺激了細(xì)胞的增殖;而DMH4+KI組與空白對照組相比，增殖率亦顯著提高(P＜0.05)，并且與KI組無明顯差異（P＞0.05），提示將VEGF的活性抑制后，300μg/L的I-環(huán)境中，細(xì)胞增殖率仍然增高。這些結(jié)果表明:300μg/L的I-環(huán)境能夠刺激VEC的增殖;在300μg/L的I-環(huán)境中，抑制VEGF的活性并不能夠抑制VEC的增殖。
　　3.I-對VEGFR-2的表達(dá)量及Tyr951，Tyr1175，Tyr1214位點(diǎn)磷酸化水

7、平的影響:Western Blot顯示各I-組與空白對照組分別比較，VEGFR-2表達(dá)量無明顯差別（P＞0.05），各濃度I-組組間比較也無明顯差別(P＞0.05)。表明I-對膜受體VEGFR-2總表達(dá)量無明顯影響。各I-組與空白對照組分別比較，VEGFR-2(Tyr1214位點(diǎn))磷酸化水平上調(diào)（P＜0.05）。I-濃度300μg/L、500μg/L、1000μg/L組與100μg/L組比較可見磷酸化水平上調(diào)(P＜0.05)。I-濃度3

8、00μg/L、500μg/L、1000μg/L三組間兩兩比較無明顯差異（P＞0.05）。這些結(jié)果表明: I-促進(jìn)膜受體VEGFR-2（Tyr1214）磷酸化水平的上調(diào)，且300～1000μg/L組比100μg/L組磷酸化水平高。針對VEGFR-2的另外兩個(gè)磷酸化位點(diǎn)的Western Blot結(jié)果:空白組未見Tyr951、Tyr1175位點(diǎn)的磷酸化蛋白印跡，I-環(huán)境也沒有誘導(dǎo)這兩個(gè)位點(diǎn)的磷酸化改變。
　　結(jié)論：1.I-促進(jìn)VEC增殖