聚維酮碘對體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響.pdf

1、目的：聚維酮碘(PVP-I)是臨床常用消毒劑，在使用過程中，是否對機(jī)體的細(xì)胞生長產(chǎn)生影響尚不很清楚。本實(shí)驗(yàn)采用體外培養(yǎng)血管內(nèi)皮細(xì)胞，研究不同濃度PVP-I對細(xì)胞增殖及SOD活性的作用，以確定PVP-I在應(yīng)用過程中是否對血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生影響。 方法： 1. 細(xì)胞培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察：以含有10％胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基常規(guī)培養(yǎng)ECV.304內(nèi)皮細(xì)胞株，傳代待細(xì)胞生長狀態(tài)穩(wěn)定后進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)。制備單細(xì)胞懸液密度為0.8～

2、1.0x105/ml，種24孔板，待細(xì)胞貼壁后加入不同濃度的PVP-I，每板均設(shè)對照組，于4、8、12和24h時觀察細(xì)胞生長狀況。 2. MTT實(shí)驗(yàn)，檢測細(xì)胞增殖情況：在PVP-I處理后的96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中每孔添加MTT試劑20μl(5mg/ml)，37℃孵育4、8、12和24h后終止培養(yǎng)，小心棄去培養(yǎng)液，用胰酶消化細(xì)胞，每孔加入150μl二甲基亞砜(DMSO)溶解，振蕩10min。用酶標(biāo)分析儀在490nm波長下測其光吸收值(O

3、D)。 3. 流式細(xì)胞術(shù)：待測細(xì)胞經(jīng)離心-PBS沖洗-吹勻-固定-再離心-沖洗-吹打-染色(4℃，20～30 min)后，400目尼龍網(wǎng)過濾后上機(jī)檢測。ModFit分析軟件分析，用細(xì)胞S期比率(SPR)表示相對增殖力。SPR=S/(G0/G1+S+G2/M)。 4. 免疫細(xì)胞化學(xué)：利用PV法檢測PVP-I處理后ECV-304細(xì)胞中PCNA、Ki-67的表達(dá)。 5. 細(xì)胞SOD活性檢測：利用試劑盒對培養(yǎng)細(xì)胞的上清液

4、中SOD活性進(jìn)行檢測。 結(jié)果： 1. PVP-I培養(yǎng)4h時除3000μg/L～4000μg/L實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞活性明顯高于對照組外，其它各組間差別無統(tǒng)計學(xué)意義；8h時900～3000μg/L實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞活性明顯高于對照組；12h時700～2500μg/L實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞活性明顯高于對照組，3000μg/L實(shí)驗(yàn)組與對照組無差別，4000μg/L實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞活性明顯低于對照組且可見明顯的形態(tài)學(xué)改變；

5、24h時100～1800μg/L實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞活性明顯高于對照組，2500～4000μg/L實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞計數(shù)及細(xì)胞活性明顯低于對照組且可見明顯的形態(tài)學(xué)改變。 2. 流式細(xì)胞術(shù)：在含不同有效碘濃度的培養(yǎng)液中培養(yǎng)細(xì)胞24h后，對照組的細(xì)胞S期比率(SPR)低于1000μg/L實(shí)驗(yàn)組而高于4000μg/L實(shí)驗(yàn)組。 3. 免疫細(xì)胞化學(xué)：不同有效碘濃度處理ECV-304細(xì)胞24h，當(dāng)有效碘濃度較低時(<500μg/L)隨有效

6、碘濃度的升高PCNA及Ki-67的表達(dá)增加，然而當(dāng)有效碘濃度較高時(>1000μg/L)隨有效碘濃度的增高PCNA及Ki-67的表達(dá)呈現(xiàn)降低的趨勢。 4. 細(xì)胞SOD活性：經(jīng)PVP-I作用后的內(nèi)皮細(xì)胞SOD活性受到影響，PVP-I培養(yǎng)24h后，SOD活性發(fā)生變化，PVP-I濃度低于1000μg/L時，SOD含量增加；PVP-I濃度高于1000μg/L時，SOD含量迅速減少。 結(jié)論： 1．PVP-I對于體外培養(yǎng)的內(nèi)