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文檔簡介
1、目的:研究葡萄糖和亮氨酸對小鼠皮膚成纖維細(xì)胞生長的影響及mTORC1信號(hào)通路在葡萄糖和亮氨基酸影響成纖維細(xì)胞生長過程中的作用。
方法：將小鼠皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)在含不同濃度葡萄糖及亮氨酸的培養(yǎng)基里，用MTT法檢測細(xì)胞增殖，用Annexin V/PI法檢測細(xì)胞凋亡，PI法流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞周期，7-MGTP pulldown實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞翻譯起始情況，Western blot檢測翻譯起始相關(guān)蛋白的表達(dá)及mTORC1信號(hào)通路分子的活
2、化。
結(jié)果：當(dāng)只增加培養(yǎng)基中葡萄糖濃度至15mmol/L或者增加亮氨酸濃度至24mmol/L時(shí)都會(huì)增加與7-MGTP結(jié)合的翻譯起始因子(eIF4E、eIF4G)，形成的有活性的翻譯起始復(fù)合物(eIF4F)增加，mTORC1信號(hào)通路活化，促進(jìn)與蛋白質(zhì)翻譯起始過程有關(guān)蛋白分子的表達(dá)，促進(jìn)L929成纖維細(xì)胞增殖(P＜0.05)，抑制凋亡，細(xì)胞周期停留在S期;而同時(shí)增加葡萄糖濃度至15mmol/L和亮氨基酸的濃度至24mmol/L時(shí)，
3、會(huì)減少與7-MGTP結(jié)合的eIF4E和eIF4G，形成的eIF4F減少，mTORC1信號(hào)通路中與細(xì)胞增殖相關(guān)的4EBP1和與細(xì)胞生存相關(guān)的Akt的磷酸化減弱，與蛋白質(zhì)翻譯起始過程有關(guān)蛋白分子的表達(dá)下降，抑制蛋白質(zhì)翻譯起始過程，抑制成纖維細(xì)胞的增殖(P＜0.05)，促進(jìn)成纖維細(xì)胞的凋亡(P＜0.05)，細(xì)胞周期被阻滯在G1期。
結(jié)論:一定范圍內(nèi)增加葡萄糖和亮氨酸的濃度會(huì)活化細(xì)胞內(nèi)mTORC1信號(hào)通路，促進(jìn)小鼠皮膚成纖維細(xì)胞生長，
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