高血壓病及其靶器官損害的臨床、分子生物學(xué)及遺傳學(xué)研究.pdf

1、目的： 隨著人們生活水平的提高，工作節(jié)奏的加快，高血壓病成為了21世紀(jì)全球的常見(jiàn)病多發(fā)病。由于中國(guó)高血壓病患者發(fā)病率高，誤診率高，漏診率高，研究中國(guó)高血壓病患者的致病因素成為了診治高血壓病的重要目標(biāo)。薈萃研究指出，易患基因+環(huán)境因素=高血壓病。高血壓病靶器官損害是影響高血壓病預(yù)后的主要問(wèn)題。其中，高血壓病患者并發(fā)左心室肥厚的比例約30-50％。因此，研究高血壓病并發(fā)左心室肥厚的危險(xiǎn)因素對(duì)臨床診治高血壓病的意義重大。盡管近10年來(lái)

2、，在高血壓病的遺傳學(xué)和環(huán)境因素研究方面取得了突飛猛進(jìn)的進(jìn)展，但是以往的研究多數(shù)將遺傳因素和環(huán)境因素孤立分析，與疾病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律不盡符合；將高脂血癥、動(dòng)脈硬化、糖尿病、代謝綜合征等疾病與高血壓病分開(kāi)研究，妨礙高血壓病病因研究的突破；以核基因、高血壓家系為主要研究對(duì)象，忽略了有“能量工廠”美譽(yù)的線粒體作用，及散發(fā)的高血壓病人群特點(diǎn)。以歐洲白種人、非洲裔美國(guó)人、高加索人群為主要研究人群，對(duì)中國(guó)人群的相關(guān)研究甚少。本研究對(duì)990例居住于中國(guó)北

3、京的漢族高血壓病患者臨床及線粒體熱點(diǎn)基因進(jìn)行分析研究，以期尋找高血壓病及其靶器官損害的遺傳學(xué)及臨床標(biāo)志，為臨床診治高血壓病提供一定的理論基礎(chǔ)及診治新靶點(diǎn)。 方法： 本研究采取多學(xué)科聯(lián)合方法：臨床工作者、遺傳學(xué)家、統(tǒng)計(jì)學(xué)家、數(shù)學(xué)、計(jì)算機(jī)及分子生物學(xué)專(zhuān)業(yè)人員組成課題組，與國(guó)外遺傳學(xué)機(jī)構(gòu)聯(lián)合，隨機(jī)選取2006年1月至2007年1月之間解放軍總醫(yī)院的門(mén)診、住院及干休所的高血壓病患者990例。對(duì)入選的高血壓病患者遺傳因素和環(huán)境因素

4、進(jìn)行分析。抽取外周靜脈血提取線粒體DNA，完善血生化及血常規(guī)檢測(cè)，完善心臟超聲檢查。采用侯選基因策略及線粒體基因全序列掃描，選取線粒體熱點(diǎn)基因(tRNALeu(UUM)，tRNIys和tRNAIle)，圍繞這3個(gè)熱點(diǎn)對(duì)高血壓病患者進(jìn)行線粒體篩查。此外，采用Mallows’Cp模型對(duì)多變量進(jìn)行逐步線性回歸分析。自變量為收縮壓，舒張壓，左室肥厚指數(shù)。因變量包括環(huán)境因素和線粒體基因點(diǎn)突變。環(huán)境因素選擇臨床上可能影響高血壓病及左心室肥厚發(fā)生發(fā)展

5、病程的主要因素如：年齡、性別、心率、體表面積、家族史、發(fā)病年齡、冠心病、腦血管病、睡眠呼吸暫停綜合征、腎臟疾病、糖尿病、治療、飲酒、吸煙、空腹血糖水平、血尿酸及肌酐水平。線粒體基因點(diǎn)突變選擇發(fā)生錯(cuò)義突變和位于tRNA或rRNA上的突變，突變率≥3‰。所有統(tǒng)計(jì)分析采用Stata7.0統(tǒng)計(jì)軟件(StataCorp，College Station，TX)和SAS9.1統(tǒng)計(jì)軟件(SAS Institiute，Carey，NC)。最后，將有意義的

6、線粒體突變患者作為先證者，采集家系成員臨床資料，分子生物學(xué)資料及建立永生細(xì)胞系，進(jìn)行線粒體功能分析。 結(jié)果： 1．我們?cè)?例(BJH1-BJH7)高血壓病患者tRNAIle基因上發(fā)現(xiàn)了線粒體點(diǎn)突變。BJH1的A4263G及BJH6的T4277C均為未報(bào)道過(guò)的新突變。BJH2的T4316ins，BJH3的A4317G和BJH4的A4295G為臨床報(bào)道的與人類(lèi)疾病密切相關(guān)的點(diǎn)突變。通過(guò)24對(duì)引物對(duì)7例患者線粒體基因全序列掃描

7、發(fā)現(xiàn)，除tRNAIle基因外，在編碼區(qū)和12sRNA基因上，7例患者存在6個(gè)共同的突變：12sRNA基因上的A750G，A1438G；ND2基因上的A4769G，A6基因上的A8860G，ND4基因上的G11719A以及CytB基因上的A15326G。 2．多元分析發(fā)現(xiàn)高血壓病患者的收縮壓與性別(β=3.52±1.27，P=0.01)及線粒體基因T8603C突變(β=26.39±10.39，P=0.01)顯著正相關(guān)(β=3.52

8、±1.27，P=0.01)，與線粒體A8343G突變(β=-22.99±9.00，P=0.01)顯著負(fù)相關(guān)。舒張壓和心率(β=0.13±0.03，P=0.01)，家族史(β=1.80±0.78，P=0.02)顯著正相關(guān)；與性別(β=-0.34±0.03，P＜0.01)，入選年齡(β=-0.34±0.03，P＜0.01)，發(fā)病年齡(β=-0.08±0.03，P=0.00)，空腹血糖(β=-1.96±0.80，P=0.01)及A8343G點(diǎn)

9、突變(β=-16.31±5.44，P=0.01)呈負(fù)相關(guān)。 3．臨床、生化及遺傳學(xué)研究結(jié)果顯示一個(gè)三代的漢族高血壓病伴左心室肥厚家系遵循母系遺傳的原則。所有的母系成員Ⅱ-1，Ⅱ-4，Ⅱ-5及Ⅲ-2均含有線粒體A4401G突變，所有的父系成員Ⅰ-1，Ⅱ-2，Ⅲ-3無(wú)此突變。270例正常對(duì)照組也無(wú)此突變。該突變?yōu)槲磮?bào)道過(guò)的新突變，且該突變位于于tRNANet和tRNAGln的結(jié)合部位。tRNAGln水平下降了27.11-40.21％

10、，tRNANet下降了20.22-30.08％。此外，母系成員氧消耗量也較對(duì)照組顯著下降(P=0.0001)。而有臨床癥狀的Ⅰ-2氧消耗量比無(wú)癥狀的母系成員Ⅱ-1和Ⅲ-2下降尤其多(P=0.0007)。 4．多元分析發(fā)現(xiàn)：環(huán)境因素與LVMI相關(guān)。如冠心病(β=7.33±2.06，P＜0.0001)，性別(β=-12.40±2.59，P＜0.0001)，腎臟疾病(β=5.83±2.41，P=0.0006)，體表面積(β=-15.8

11、3±6.83，P=0.0042)，家族史(β=-5.01±2.15，P=0.0038)，發(fā)病年齡(β=-0.32±0.07，P=0.0042)，收縮壓(β=0.23±0.06，P＜0.0001)和舒張壓(β=-0.39±0.09，P=0.0107)。 結(jié)論： 1．線粒體tRNAIle基因突變?cè)谠l(fā)性高血壓的發(fā)病機(jī)制中的作用不容忽視，可能成為臨床上診斷及治療原發(fā)性高血壓的新靶點(diǎn)，值得深入研究。 2．環(huán)境因素(性別、