槐實(shí)槲皮素的生物轉(zhuǎn)化工藝及抗抑郁生物活性研究.pdf

1、本研究是以槐角中蘆丁為原料，采用黑曲霉As3.4309發(fā)酵產(chǎn)酶轉(zhuǎn)化蘆丁制備槲皮素，并研究槲皮素的抗抑郁活性。本論文主要從槐角中蘆丁的分離純化、黑曲霉As3.4309發(fā)酵轉(zhuǎn)化蘆丁的條件優(yōu)化及產(chǎn)物鑒定、轉(zhuǎn)化產(chǎn)物槲皮素的抗抑郁活性這三個(gè)方面展開研究。 1)采用乙醇回流法提取槐角中的粗黃酮，得率達(dá)到15.9％。通過AB-8型大孔吸附樹脂來富集、提取純化蘆丁產(chǎn)物。通過對(duì)大孔吸附樹脂的吸附和洗脫條件進(jìn)行優(yōu)化，可以得到純度較高的蘆丁結(jié)晶。確定

2、的最佳工藝條件為：自然pH，吸附流速為0.5 mL/min，上柱液濃度為375 mg/L，洗脫液為乙醇.水體系70％(體積比)，洗脫速度為10 mL/min。 2)將自制蘆丁純品應(yīng)用于黑曲霉As3.4309發(fā)酵轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)。首先對(duì)黑曲霉As3.4309發(fā)酵產(chǎn)B-葡萄糖苷酶和蘆丁a-鼠李糖苷酶的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為：碳源(3％稻草粉+2％麩皮)、氮源(0.5％硫酸銨+0.5％蛋白胨)、pH7，0接種量為10％、Mandels氏

3、營(yíng)養(yǎng)鹽液30 mL，轉(zhuǎn)速180 r/min，30℃發(fā)酵。通過優(yōu)化以后，發(fā)酵液中B-葡萄糖苷酶酶活由最初的11.53 U/mL提高到26.82U/mL；蘆丁.a.鼠李糖苷酶酶活由1.12 U/mL提高到1.69 U/mL。在最優(yōu)產(chǎn)酶條件下對(duì)蘆丁進(jìn)行轉(zhuǎn)化，得到2種新的化合物。經(jīng)過Sephadex-G10凝膠層析，主要產(chǎn)物純度達(dá)到95.53％。經(jīng)過核磁共振檢測(cè)其結(jié)構(gòu)可以斷定主要產(chǎn)物為槲皮素。 3)通過建立PCI2神經(jīng)細(xì)胞的皮質(zhì)酮損傷模

4、型模擬神經(jīng)元損傷狀態(tài)，考察了槲皮素的抗抑郁活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：槲皮素對(duì)PCI2神經(jīng)細(xì)胞的半數(shù)中毒濃度TCs0為23.58umol·L-1。在最大無毒濃度16 umol.l-1內(nèi)，槲皮素對(duì)高濃度皮質(zhì)酮損傷PCI2細(xì)胞有很明顯的保護(hù)作用，最小有效濃度為0.125 umo1·L-1。 4)采用經(jīng)典的評(píng)價(jià)抗抑郁活性的小鼠游泳和懸尾實(shí)驗(yàn)，在體內(nèi)進(jìn)一步研究了槲皮素的抗抑郁活性?？梢钥闯龌苯情纹に啬茱@著縮短小鼠的絕望不動(dòng)時(shí)間，表現(xiàn)顯的抗抑郁活