益母草堿—半胱氨酸類似物的綴合物的合成及其心肌保護作用機制的初步研究.pdf

1、目的：中藥益母草中的有效成分益母草堿和半胱氨酸類似物均已被證實具有心臟保護作用。鑒于兩者良好的藥理活性,本研究以二者為先導化合物,設計并合成了一系列益母草堿-半胱氨酸類似物的綴合物,比較益母草堿與不同的半胱氨酸類似物的綴合物對心肌細胞損傷的保護作用,篩選優(yōu)勢候選化合物,并探討其對缺血性損傷心肌細胞的抗氧化和抗凋亡作用,進一步闡明其作用機制,為臨床有效治療缺血性心臟病研發(fā)新藥提供理論基礎。
　　方法：第1部分:以丁香酸為起始原料,依

2、次經(jīng)過羰基化反應,酯化反應和酯的水解等反應,合成得到益母草堿與半光氨酸類似物相結合的綴合物,并采用MS、NMR和HRMS對其結構進行鑒定,采用HPLC對新化合物的純度進行分析。第2部分:以原代乳鼠心肌細胞為研究對象,分為常氧處理組、缺氧模型組、益母草堿-半胱氨酸類似物的綴合物處理組。MTT法檢測細胞存活率,比色法檢測培養(yǎng)液中乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)活性、細胞上清液H2S濃度及運用Hoechst染色

3、觀察細胞形態(tài)。第3部分:以原代乳鼠心肌細胞為研究對象,分為常氧處理組、缺氧模型組、新化合物1a處理組。比色法檢測超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過氧化氫酶(catalase,CAT)、活性氧物質(ROS)、脂質過氧化產(chǎn)物(MDA)和凋亡相關因子Caspase-3活性;采用RT-PCR方法觀察bcl-2、bax、caspase-3及胱硫醚-γ-裂解酶(cystathione-γ-lyase,CSE)mR

4、NA的表達;采用Western Blot方法觀察Bcl-2、Bax、Caspase-3、CSE、Akt的表達;Annexin V-FITC/PI雙染觀察凋亡變化;采用JC-1染色法觀察線粒體膜電位的變化;采用透射電鏡的方法觀察心肌細胞超微結構的變化。
　　結果：第1部分:設計并合成一系列益母草堿-半胱氨酸衍生物的綴合物,并經(jīng)MS、NMR和HRMS對其結構進行確認,HPLC純度分析結果表明新化合物的純度符合實驗要求。第2部分:新化合

5、物1a、1b和2具有心肌細胞的保護作用,其中1a的藥理活性優(yōu)于1b和2;新化合物1a與其前體化合物益母草堿和SPRC比較,其用藥濃度為益母草堿的1/10和SPRC的1/100,表明新化合物1a的效價優(yōu)于其前體化合物。新化合物1a能提高缺氧心肌細胞的存活率、降低心肌細胞LDH的漏出率,上調(diào)H2S的含量。第3部分:新化合物1a能提高心肌細胞內(nèi)SOD、CAT酶的活性,降低ROS和MDA的含量;上調(diào)bcl-2基因和蛋白的表達,下調(diào)bax和cas