SCCmec伴隨基因psM-mec與血液來源人葡萄球菌生物被膜形成能力及耐藥性的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　人葡萄球菌是引起血流感染的重要病原菌，分離率逐年增高，耐藥性強、易產(chǎn)生物被膜，臨床治療十分棘手，引起醫(yī)學界廣泛關(guān)注。本文旨在通過研究血液來源人葡萄球菌生物被膜形成能力、耐藥性特點，分析psm-mec基因與生物被膜形成能力和耐藥性之間的相關(guān)性，為人葡萄球菌感染的防治提供依據(jù)。
　　方法:
　　1.收集血液來源經(jīng)全自動微生物分析系統(tǒng)鑒定的人葡萄球菌。
　　2.采用瓊脂稀釋法檢測血液來源人葡萄球菌對16種抗

2、菌藥物的最低抑菌濃度(Minimal inhibitory concentration，MIC)，通過PCR擴增mecA基因準確驗證和區(qū)分耐甲氧西林人葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcushominis，MRSHo）和甲氧西林敏感人葡萄球菌（methicillin-susceptiveStaphylococcus hominis，MSSHo），比較二者在耐藥譜上的差異。
　　3.半定量粘

3、附實驗(Microtite Plate Assay, TCP)檢測血液來源人葡萄球菌生物被膜形成能力，分析生物被膜組與非生物被膜組菌株在耐藥譜上的差異。
　　4.PCR初篩攜帶psm-mec基因菌株，擴增fudoh基因和DNA測序驗證psm-mec檢測結(jié)果，分析psm-mec基因與生物被膜形成能力和耐藥性之間的相關(guān)性。
　　5.PCR擴增mecR1/psm-mec與psm-mec/xylR基因間隔序列，探究psm-mec基因

4、在SCCmec上的定位特點。
　　6.多重PCR法對攜帶psm-mec基因菌株SCCmec分型，了解其SCCmec的分型情況。
　　7.采用多重PCR分別檢測攜帶psm-mec基因菌株的mec與ccr型別，分析其SCCmec的構(gòu)成特點。
　　結(jié)果:
　　1.收集血液來源人葡萄球菌共55株。
　　2.藥敏試驗顯示，55株血液來源人葡萄球菌對利奈唑胺、呋喃妥因、普丁/達福、萬古霉素和替加環(huán)素五種抗菌藥物全部敏感

5、，對苯唑西林、青霉素、紅霉素、復(fù)方新諾明、克林霉素、環(huán)丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、四環(huán)素、利福平和慶大霉素的耐藥率分別為85.45％、92.73％、87.27％、65.45％、67.27％、47.27％、47.27％、34.55％、41.82％、16.36％和10.91％。
　　3.55株血液來源人葡萄球菌中，46(83.64％)株為MRSHo，其中45株mecA基因陽性，1株陰性，其余9(16.36％)株為MSSHo，均未檢出

6、mecA基因。MRSHo對環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星、莫西沙星、青霉素、四環(huán)素和復(fù)方新諾明六種抗菌藥物的耐藥率高于MSSHo，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　4.TCP實驗顯示，55株血液來源人葡萄球菌中，生物被膜陽性35株，占63.6％，陰性20株，占36.4％。
　　5.生物被膜組細菌對16種抗菌藥物的耐藥率與非生物被膜組間不存在差異(P＞0.05)。
　　6.psm-mec基因在MRSHo中的檢出率為39.

7、13％(18/46)，在MSSHo中未檢出。18株psm-mec基因陽性的菌株均擴增出fudoh，測序結(jié)果經(jīng)Blast比對顯示，均與psm-mec基因編碼序列完全匹配。
　　7.攜帶psm-mec基因的人葡萄球菌產(chǎn)生物被膜率為83.33％(15/18)，高于未攜帶psm-mec基因人葡萄球菌54.1％(20/37)的產(chǎn)生物被膜率，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。分析fudoh基因測序結(jié)果發(fā)現(xiàn)，3株攜帶psm-mec未產(chǎn)生物被膜

8、的菌株中，2株在psm-mec上游-12處單堿基突變(G＞A)。攜帶psm-mec基因菌株較未攜帶psm-mec菌株更易對β-內(nèi)酰胺類、四環(huán)素和復(fù)方新諾明耐藥，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。
　　8.所有18株psm-mec陽性菌株，mecR1/ psm-mec和psm-mec/xylR兩段基因間隔序列擴增均陽性。
　　9.18株攜帶psm-mec基因的SCCmec型別檢測顯示，2(11.1％)株為典型SCCmecⅢ型

9、（ⅢA，ⅢB各一株），16(88.9％)株無法分型，其中，4株為類ⅢA型（ⅢA-Tn554/orfX），3株為類ⅢB型（2株ⅢB+pls，1株ⅢB-IS431-Pub110），9株為SCCmec新型別。
　　10.攜帶psm-mec基因菌株的mec與ccr型別檢測顯示，18株菌株均為Class Amec;11株擴增出ccr，其中6株為ccr type1，1株為ccr type1+2，2株為ccr type1+3，其余7株未擴增出c

10、cr。
　　結(jié)論:
　　1.血液來源人葡萄球菌甲氧西林耐藥率高，耐甲氧西林菌株易同時對環(huán)丙沙星、左旋氧氟沙星、莫西沙星、青霉素、四環(huán)素和復(fù)方新諾明耐藥。
　　2.血液來源人葡萄球菌生物被膜能力形成強，生物被膜組細菌耐藥譜與非生物被膜組間無差異。
　　3.定位于mecR1與xylR間的psm-mec基因廣泛存在血液來源的SCCmecⅢ亞型、變異型和新型別人葡萄球菌中。
　　4.血液來源人葡萄球菌中，攜帶psm