血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2基因轉(zhuǎn)染抑制頸總動(dòng)脈缺血再灌注損傷后內(nèi)膜新生.pdf

1、目的:探討慢病毒重組血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(LV-ACE)2基因過(guò)表達(dá)對(duì)于大鼠頸總動(dòng)脈缺血再灌注損傷后內(nèi)膜新生的影響和相關(guān)機(jī)制。
　　方法:1、將250g左右的SD雄性大鼠分為5組:CT組為正常對(duì)照組,SHAM組為假手術(shù)組,W1組為缺血再灌注損傷1周組,W2組為缺血再灌注損傷2周組,W4組為缺血再灌注損傷4周組,每組10只。建立頸總動(dòng)脈缺血再灌注損傷后,通過(guò)HE染色觀察缺血再灌注損傷后不同時(shí)間內(nèi)膜增生情況,選取最佳干預(yù)時(shí)間終點(diǎn)。2、將S

2、D雄性大鼠分為5組:A組為正常對(duì)照組,B組為缺血再灌注損傷組,C組為慢病毒重組綠色熒光蛋白(LV-GFP)干預(yù)組,D組為慢病毒重組血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(LV-ACE2)干預(yù)組,E組為紫杉醇干預(yù)組,每組10只。經(jīng)管腔內(nèi)局部孵育LV-ACE2基因及其他干預(yù)組,HE染色觀察ACE2及其他組對(duì)新生內(nèi)膜增生的影響;VanGieson染色和Masson染色方法觀察ACE2及其他組對(duì)新生內(nèi)膜中膠原表達(dá)變化的影響;油紅O染色觀察ACE2及其他組對(duì)新生內(nèi)膜

3、中脂質(zhì)表達(dá)變化的影響;放射免疫法檢測(cè)ACE2及其他各組血漿AngII表達(dá)水平;熒光顯微鏡下觀察慢病毒轉(zhuǎn)染效率;通過(guò)免疫組化方法觀察新生內(nèi)膜中ACE2、α-SM-actin、CD31、AT1R、P-ERK1/2的表達(dá)變化;
　　結(jié)果:1、缺血再灌注損傷能形成穩(wěn)定新生內(nèi)膜現(xiàn)象,通過(guò)HE染色觀察1、2、4周時(shí)與對(duì)照組比較新生內(nèi)膜面積/中膜面積(I/M)值(0.36±0.03,0.78±0.12,1.51±0.15vs0.01±0.004

4、,P<0.01);2、通過(guò)熒光觀察慢病毒攜帶目的蛋白能有效轉(zhuǎn)染到血管壁上;3、通過(guò)組化觀察,ACE2能在新生內(nèi)膜中長(zhǎng)期有效的表達(dá),D組與B組IOD值分別為(2393.70±283.46vs1080.40±251.93,P<0.01);4、通過(guò)HE染色觀察,ACE2組能明顯抑制內(nèi)膜增生,D組與B組I/M值分別為(0.70±0.17vs1.53±0.16,P<0.01);5、通過(guò)VanGieson染色觀察,ACE2組能明顯抑制新生內(nèi)膜中膠原

5、表達(dá),D組與B組陽(yáng)性面積比分別為(7.32±1.48vs31.88±4.37,P<0.05);6、通過(guò)Masson染色觀察,ACE2組能明顯抑制新生內(nèi)膜中膠原表達(dá),D組與B組陽(yáng)性面積比分別為(10.54±2.06vs34.64±5.93,P<0.05);7、通過(guò)油紅O染色觀察,ACE2過(guò)表達(dá)能抑制新生內(nèi)膜中脂質(zhì)表達(dá),D組與B組脂質(zhì)含量百分比分別為(7.27±1.36vs13.99±2.9,P<0.01);8、通過(guò)放射免疫法檢測(cè),ACE2

6、過(guò)表達(dá)不能有效抑制血漿中AngII表達(dá),D組與B組血漿中AngII分別為(1228.97±107.2vs1251.03±158.95,P=0.775);9、通過(guò)組化觀察,ACE2過(guò)表達(dá)能抑制新生內(nèi)膜中平滑肌細(xì)胞增生,D組與B組IOD值分別為(5842.90±839.40vs12648.40±1760.41,P<0.01);10、通過(guò)組化觀察,ACE2能抑制新生內(nèi)膜中新生血管表達(dá),D組與B組微血管密度分別為(12.40±4.01vs96.

7、20±17.79,P<0.01);11、通過(guò)組化觀察,ACE2能抑制新生內(nèi)膜中AT1R表達(dá),D組與B組IOD值分別為(1218.60±174.51vs4860.80±544.79,P<0.01);12、通過(guò)組化觀察,ACE2能抑制新生內(nèi)膜中P-ERK1/2的表達(dá),D組與B組IOD值分別為(1039.70±215.12vs2938.40±285.63,p<0.01)。
　　結(jié)論:大鼠頸總動(dòng)脈缺血再灌注損傷后能夠形成穩(wěn)定的內(nèi)膜新生現(xiàn)象