多重PCR分子診斷和p53、HBB基因點突變檢測研究及艾滋病基因治病相關前期研究.pdf

1、第一部分，介紹由“公共引物”介導的多重PCR技術的應用研究。
　　 目的：建立由“公共引物”介導的PCR反應體系及條件以期進一步用于多重PCR體系的建立。
　　 方法：以噬菌體基因組為參考序列設計“公共引物”序列，并以人類基因組為模板檢測“公共引物”結合“嵌合引物”的特異性及靈敏性。
　　 結果：“公共引物”具有高特異性、高敏感性的特點，“公共引物”結合“嵌合引物”PCR反應體系可大幅降低“嵌合引物”濃度。

2、>　　 結論：由“公共引物”介導的PCR反應體系可大幅降低引物間相互作用概率，為多重PCR體系的建立奠定基礎。
　　 第二部分，突變敏感性“分子開關”檢測p53、HBB基因熱點突變。
　　 目的：利用突變敏感性“分子開關”技術建立對p53、HBB基因熱點突變的檢測體系。
　　 方法：利用PCR及基因克隆技術得到p53、HBB基因野生及突變模板質粒。設計硫化修飾引物，利用突變敏感性“分子開關”技術對突變位點進行檢

3、測。
　　 結果：當硫化修飾檢測引物與突變模板配對時，反應得以進行，有PCR產(chǎn)物;與野生模板不配對時，反應非成熟性終止，無PCR產(chǎn)物。
　　 結論:突變敏感性“分子開關”技術能夠快速檢測p53、HBB基因突變位點，達到非此即彼的二元化效果。
　　 第三部分，TALENs蛋白酶在艾滋病基因治療應用的前期研究。
　　 目的：構建具有剪切CCR5基因的TALENs腺病毒包裝載體，并建立相應的蛋白酶活性檢測系統(tǒng)。