損傷滑膜細(xì)胞上清液作用下應(yīng)力損傷和PGE2對前交叉韌帶成纖維細(xì)胞中LOX家族及MMP-1，2，3表達(dá)的影響.pdf

1、隨著進(jìn)行體育運(yùn)動(dòng)的人數(shù)不斷增多，膝關(guān)節(jié)韌帶損傷的機(jī)率也大幅增加。前交叉韌帶（anterior cruciate ligament，ACL）以及后交叉韌帶在損傷后缺乏自我修復(fù)的能力，因此其損傷后康復(fù)治療十分重要。目前對前交叉韌帶損傷大部分采用關(guān)節(jié)置換外科手術(shù)進(jìn)行治療，但效果不佳并不能恢復(fù)其本來的生物力學(xué)特性，因此尋找新的有效治療方法顯得格外迫切。大量研究已經(jīng)證實(shí)，在前交叉韌帶損傷后關(guān)節(jié)液中炎癥因子以及基質(zhì)金屬蛋白酶的大量積累打破了胞外基質(zhì)

2、合成與降解的動(dòng)態(tài)平衡，阻礙了前交叉韌帶重塑的進(jìn)程，因此我們推測促炎因子可能在ACL損傷修復(fù)過程中起重要作用。
　　本研究選用體外培養(yǎng)的正?；ぜ?xì)胞(Synovial cells，SC)上清液、損傷滑膜細(xì)胞上清液、損傷滑膜細(xì)胞上清液與PGE2分別作用于ACL成纖維細(xì)胞，觀察細(xì)胞的遷移能力;12％應(yīng)力刺激或與10ng/ml前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)協(xié)同處理損傷SC上清液培養(yǎng)下的ACL成纖維細(xì)胞，在處理后

3、第1，3，6，12小時(shí)RT-PCR檢測MMP-1，2，3的表達(dá);分別在處理后第12、24、48、72小時(shí)明膠酶譜法檢測培養(yǎng)液中MMP-2活性，并進(jìn)行相對定量分析。結(jié)果顯示，損傷SC上清液或與PGE2協(xié)同作用可以增強(qiáng)ACL成纖維細(xì)胞的遷移能力且協(xié)同作用下更為明顯。在損傷SC上清液作用下，應(yīng)力損傷或與PGE2對前交叉韌帶成纖維細(xì)胞中LOXS基因表達(dá)下調(diào)，對MMP-1，2，3基因表達(dá)上調(diào)。酶譜結(jié)果顯示應(yīng)力損傷或與PGE2均促進(jìn)ACL成纖維細(xì)胞

4、中MMP-2活性，且具時(shí)間依賴性。
　　在單獨(dú)培養(yǎng)和與滑膜細(xì)胞共培養(yǎng)條件下用FX-4000柔性基底拉伸系統(tǒng)對ACL成纖維細(xì)胞施加4h，6％，1.0 Hz的周期性機(jī)械拉伸。繼續(xù)培養(yǎng)12h后，觀察細(xì)胞形態(tài)，用MTS檢測不同培養(yǎng)體系對ACL成纖維細(xì)胞活性的影響，明膠酶譜法檢測ACL成纖維細(xì)胞上清液中MMP-2活性。結(jié)果顯示，各組細(xì)胞均生長良好，未受到物理損傷。實(shí)驗(yàn)共分為四組:單培養(yǎng)組（對照組）;單培養(yǎng)且對ACL成纖維細(xì)胞施加6％周期性機(jī)

5、械拉伸（動(dòng)態(tài)組）;ACL成纖維細(xì)胞（下室）與SC（共培養(yǎng)組）;共培養(yǎng)組且對位于下室的ACL成纖維細(xì)胞施加6％周期性機(jī)械拉伸（動(dòng)態(tài)共培養(yǎng)組）。動(dòng)態(tài)組和動(dòng)態(tài)共培養(yǎng)組的ACL成纖維細(xì)胞呈現(xiàn)垂直于拉伸方向定向排列。共培養(yǎng)組、動(dòng)態(tài)共培養(yǎng)組與對照組比較，ACL成纖維細(xì)胞活性有顯著增加，且ACL成纖維細(xì)胞上清液中MMP-2的活性顯著增強(qiáng)。
　　綜上所述，滑膜組織及炎癥因子PGE2對ACL損傷和修復(fù)起著至關(guān)重要的作用。并且通過對ACL成纖維細(xì)胞和