維生素C對(duì)體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞HAS-2，MMP-1基因表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)研究維生素C對(duì)體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞HAS-2，MMP-1mRNA轉(zhuǎn)錄水平的影響，探討維生素C減緩皮膚老化的機(jī)制。 方法：首先采用酶聯(lián)合消化法進(jìn)行體外人皮膚成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)，然后將不同濃度的維生素C加入體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞，待藥物作用24小時(shí)后，提取細(xì)胞的總RNA，通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)獲得cDNA，并進(jìn)行體外擴(kuò)增，對(duì)擴(kuò)增的產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，通過(guò)凝膠成像系統(tǒng)根據(jù)條帶的灰度值來(lái)判斷成纖維細(xì)胞中HAS-2，MM

2、P-1mRNA的表達(dá)水平。 結(jié)果：經(jīng)過(guò)酶聯(lián)合消化法體外培養(yǎng)的人皮膚成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)良好，細(xì)胞形態(tài)呈典型的梭形、柳葉形。用細(xì)胞計(jì)數(shù)法對(duì)培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)并繪制生長(zhǎng)曲線，曲線顯示：潛伏期0-2天，指數(shù)生長(zhǎng)期2-5天，進(jìn)入平臺(tái)期。對(duì)體外原代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行維生素C的干預(yù)，經(jīng)β-actin內(nèi)參校正后，RT-PCR示高劑量組與低劑量組及對(duì)照組相比HAS-2 mRNA表達(dá)水平的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，低劑量組與對(duì)照組相比，HAS-2 mRNA表達(dá)水平