防齲基因疫苗pVAX1-SG、pVAX1-SSG經(jīng)不同途徑免疫BABL-c小鼠和SD大鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：用防齲基因疫苗pVAX1-SG和pVAX1-SSG經(jīng)肌肉注射，頜下腺周注射及鼻粘膜滴注三種不同途徑來分別免疫BABL/c小鼠和SD大鼠，觀察其免疫效果，并探索最佳免疫途徑。 方法：本研究包括三個(gè)部分 實(shí)驗(yàn)一：重組質(zhì)粒pVAX1-SG、pVAX1-SSG及空載體質(zhì)粒pVAX1的鑒定和大量制備。先小量抽提儲(chǔ)存的重組質(zhì)粒pVAX1-SG、pVAX1-SSG及空載體質(zhì)粒pVAX1。并經(jīng)過限制性內(nèi)切酶酶切、凝膠電泳鑒定。在鑒

2、定正確的基礎(chǔ)上，大量抽提重組質(zhì)粒并計(jì)算其濃度和純度，貯存以備免疫動(dòng)物。 實(shí)驗(yàn)二：用重組質(zhì)粒pVAX1-SG、pVAX1-SSG及空載體質(zhì)粒pVAX1免疫BABL/c小鼠的實(shí)驗(yàn)研究。6周齡雄性BALB/c小鼠64只，隨機(jī)分為8組，每組8只。A組：生理鹽水鼻腔滴注組（空白對(duì)照組）；B組：pVAX1（空載質(zhì)粒）股四頭肌注射組（陰性對(duì)照組）；C組：pVAX1-SG雙側(cè)頜下腺區(qū)皮下注射組；D組：pVAX1-SG股四頭肌注射組；E組：pVA

3、X1-SG鼻腔粘膜注滴組；F組：pVAX1-SSG雙側(cè)頜下腺區(qū)皮下注射組；G組：pVAX1-SSG股四頭肌注射組；H組：pVAX1-SSG鼻腔粘膜滴注組。每周一次，連續(xù)免疫三周，每次劑量為100μg/只（生理鹽水組為100μl/只）。分別于免疫前1天和免疫后1，2，3，4周收集血清和唾液樣本。至第4周取血、唾液完畢后，稱重并處死小鼠，解剖分離其心、肝、脾、肺、腎等重要臟器，進(jìn)行病理檢查。采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（間接ELISA法）檢測(cè)血液和

4、唾液中IgG和S-IgA抗體水平。 實(shí)驗(yàn)三：用重組質(zhì)粒pVAX1-SG、pVAX1-SSG及空載體質(zhì)粒pVAX1免疫SD大鼠的實(shí)驗(yàn)研究。出生18天的雄性SD大鼠64只，建立齲齒模型；其分組情況、免疫途徑、免疫時(shí)間、病理學(xué)檢查及特異性抗體的檢測(cè)的方法同小鼠；樣本采集從免疫開始前一天至鼠齡80天時(shí)，每周采集一次；在鼠齡80天時(shí)稱重并處死動(dòng)物，并取上下頜骨，進(jìn)行齲損評(píng)定，根據(jù)Keyes經(jīng)典評(píng)分方法進(jìn)行評(píng)估。 結(jié)果： ①

5、用試劑盒提出高純度、高濃度的重組質(zhì)粒pVAX1-SG、pVAX1-SSG及空載體質(zhì)粒pVAX1。②pVAX1-SG和pVAX1-SSG免疫BABL/c小鼠和SD大鼠后S-IgA型特異性抗體和IgG型特異性抗體均明顯升高，并持續(xù)數(shù)周。且鼻腔滴注組和頜下腺區(qū)皮下注射組比股四頭肌注射組誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性抗體要高（P<0．05）。③在相同途徑下pVAX1-SSG誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性抗體比pVAX1-SG誘導(dǎo)產(chǎn)生的特異性抗體高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．

6、05）。④實(shí)驗(yàn)組與陰性對(duì)照組相比，齲損明顯降低，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0．05）。 結(jié)論： ①防齲基因疫苗pVAX1-SG和pVAX1-SSG能誘導(dǎo)BABL/c小鼠和SD大鼠的唾液和血液中特異性抗體的產(chǎn)生；②兩種防齲基因疫苗經(jīng)三種途徑免疫后均可降低SD大鼠的齲損程度。③鼻腔粘膜免疫可能是pVAX1-SG和pVAX1-SSG最有效的免疫途徑。④pVAX1-SSG比pVAX1-SG能夠更好的誘導(dǎo)特異性抗體的產(chǎn)生，更能有效的減輕