pVAX1-INF-α作為豬藍(lán)耳病疫苗免疫佐劑的評(píng)價(jià).pdf

1、豬繁殖和呼吸綜合征（Porcinere productive and respiratory syndrome，PRRSV），是由PRRSV引起豬的一種繁殖障礙和呼吸道炎癥的國(guó)家二類(lèi)傳染病。又稱(chēng)“豬藍(lán)耳病”(Blue-ear disease)。PRRSV主要感染豬的巨噬細(xì)胞，損傷免疫器官導(dǎo)致機(jī)體免疫功能下降，從而引起免疫抑制，使感染豬極易繼發(fā)各種疾病。PRRSV疫苗較弱的免疫原性和交叉保護(hù)效果是最近在PRRSV免疫方面較重要的問(wèn)題。在細(xì)

2、胞免疫和體液免疫方面都有提高的情況下，才可以起到不同基因型毒株之間的交叉保護(hù)。利用佐劑提高PRRSV疫苗的免疫效果和交叉保護(hù)效果是最近的一大研究熱點(diǎn)。
　　 PRRSV不同于其他病毒，感染豬后會(huì)抑制體內(nèi)IFN-α的產(chǎn)生。本研究利用重組豬IFN-α分別以不同的注射方式和不同的注射部位免疫，同時(shí)免疫藍(lán)耳病疫苗，研究增加外源IFN-α對(duì)免疫反應(yīng)的提高和PRRSV引起的免疫抑制的改善。
　　 1.本試驗(yàn)體外克隆了豬IFN-α基因

3、，將其克隆到pVAX1載體上，構(gòu)建重組真核表達(dá)載體pVAX1-IFN-α，將此重組質(zhì)粒在293細(xì)胞中轉(zhuǎn)染表達(dá)，Western-blot檢測(cè)IFN-α的表達(dá)情況。蛋白質(zhì)印跡分析表明，轉(zhuǎn)染48h后可在上清中檢測(cè)到分泌的IFN-α，表達(dá)產(chǎn)物大約為27KD。
　　 2.將重組的pVAX1-IFN-α質(zhì)粒與藍(lán)耳病弱毒疫苗同時(shí)免疫八周齡豬，使用ELISA法檢測(cè)豬藍(lán)耳病中和抗體。再將免疫豬的淋巴細(xì)胞體外培養(yǎng)，檢測(cè)其分泌產(chǎn)生的IFN-γ，評(píng)估細(xì)

4、胞免疫反應(yīng)。中和抗體的結(jié)果表明，肌肉注射用PLL包裹的pVAX1-IFN-α重組質(zhì)粒，和淋巴結(jié)注射pVAX1-IFN-α重組質(zhì)粒分別聯(lián)合弱毒苗免疫，都可以明顯提高豬體內(nèi)的中和抗體水平。體外刺激淋巴細(xì)胞分泌產(chǎn)生IFN-γ的結(jié)果表明，加PLL修飾的pVAX1-IFN-α重組質(zhì)粒組和淋巴結(jié)注射pVAX1-IFN-α重組質(zhì)粒組所測(cè)得的值都明顯高于對(duì)照組。
　　 因此pVAX1-IFN-α重組表達(dá)質(zhì)粒作為佐劑免疫動(dòng)物，可以提高機(jī)體的體液免