大劑量鹽酸氨溴索對大鼠百草枯中毒肺泡表面活性物質(zhì)影響的研究.pdf

1、目的：百草枯(Paraquat，PQ)是目前世界范圍內(nèi)使用較廣泛的除草劑之一，對人畜有較高毒性。由于其中毒致死量小，且目前尚無特效解毒劑，故病死率較高，國內(nèi)個別報道病死率可達(dá)80％以上。肺臟是百草枯中毒后主要損害的靶器官，可造成急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)，是PQ中毒患者的主要死亡原因。
　　 目前普遍認(rèn)為百草枯中毒所造成的肺損傷主要與氧自由基、過度脂質(zhì)過氧化反應(yīng)所產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化以及體內(nèi)還原型谷光甘肽(GSH)含量減少有關(guān)?，F(xiàn)

2、在臨床上主要應(yīng)用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑及抗自由基等藥物，減低PQ誘導(dǎo)的過氧化損傷。有研究表明，百草枯中毒可造成肺泡表面活性物質(zhì)(ps)異常，可能是造成百草枯中毒急性肺損傷的原因。
　　 鹽酸氨溴索是一種具有多種生物學(xué)效應(yīng)的粘液溶解劑。鹽酸氨溴索可抑制肺泡巨噬細(xì)胞溶酶體內(nèi)的磷脂酶A的活性，降低其對磷脂的降解作用，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)的谷胱甘肽(GSH)的合成，對抗氧自由基的破壞作用。
　　 因此，本實(shí)驗(yàn)通過腹腔注射百草枯建立大鼠急性

3、肺損傷模型，觀察大劑量鹽酸氨溴索對肺泡表面活性蛋白C(SP-C)及氧化-還原各指標(biāo)的影響，評價大劑量鹽酸氨溴索對百草枯中毒所致急性肺損傷的治療作用。
　　 方法：將136只SD大鼠，體重250-300克，隨機(jī)分入以下三個實(shí)驗(yàn)組：①生理鹽水組（NS組，n=24）：腹腔注入等容量生理鹽水，1.25ml/kg;②百草枯組(PQ組，n=56)：腹腔注入2％百草枯(25mg/Kg)稀釋液；③氨溴索治療組(ambroxol treatmen

4、t，AT組，n=56)：百草枯染毒后每日腹腔注入含鹽酸氨溴索(40mg/kg)的等容量生理鹽水，1.25ml/kg。PQ組和AT組再分別按時間點(diǎn)隨機(jī)均分為4組，分別為實(shí)驗(yàn)1d組、3d組、5d組、7d組。其中，NS組24只，各時間點(diǎn)均為6只；PQ組1d組、3d組、5d組各12只，7d組20只；AT組1d組、3d組、5d組各12只，7d組20只。7d組觀察病死率。麻醉動物后，自下腔靜脈處取靜脈血，常規(guī)測定血液中WBC的總數(shù)，PMN百分比，丙

5、二醛(MDA)的含量，超氧化物歧化酶(SOD)活性，谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)活性。剪取右肺組織行光鏡觀察，左肺用免疫組化染色觀察SP-C在肺組織的表達(dá)。采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。單因素方差分析進(jìn)行組間比較，有顯著差異者用最小顯著差法（leastsignificant difference， LSD）進(jìn)行兩兩比較，其分布采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((?)±s)的方式描述。率的比較采用x2檢驗(yàn)。P＜0.05表示有顯著差異。

6、
　　 結(jié)果：1動物存活情況各7天組比較，NS組12只中無死亡，PQ組20只中死亡16只（病死率80.0％），AT組20只中死亡10只（病死率50.0％）。PQ組與AT組病死率有顯著性差異(P＜0.05)
　　 2血液中WBC數(shù)量和PMN百分比的變化
　　 2.1血液中WBC總數(shù)的變化：NS組各時間點(diǎn)數(shù)值比較無差異(P＞0.05)。染毒后WBC總數(shù)增高，PQ組、AT組與NS組各相應(yīng)時間點(diǎn)數(shù)值比較差異有顯著性(P＜

7、0.01，P＜0.05)。AT組較PQ組各相應(yīng)時間點(diǎn)值低，3d，5d時兩組差異有顯著性(P＜0.01，P＜0.05)。1d，7d無顯著差異(P＞0.05)。
　　 2.2血液中PMN百分比的變化：NS組各時間點(diǎn)數(shù)值比較無差異。染毒后PMN百分比增高，PQ組、AT組與NS組各相應(yīng)時間點(diǎn)數(shù)值比較差異有顯著性(P＜0.01，P＜0.05)。AT組較PQ組各相應(yīng)時間點(diǎn)值低，3d，5d時兩組差異有顯著性(P＜0.01，P＜0.05)。1d

8、，7d無顯著差異(P＞0.05)
　　 3血漿中MDA、SOD、GSH的變化
　　 3.1血漿中MDA的變化：NS組各時間點(diǎn)數(shù)值比較無明顯差異(P＞0.05)。PQ組比NS組明顯增高(P＜0.01)。AT組與NS組各相應(yīng)時間點(diǎn)值比較，1d、3d有顯著性差異(P＜0.05)，5d、7d無明顯差異；比PQ組各相應(yīng)時間點(diǎn)值低，3d、5d兩組有顯著性差異(P＜0.01)。
　　 3.2血漿SOD的變化：NS組各時間點(diǎn)值比

9、較無明顯差異(P＞0.05)。染毒后SOD降低，PQ組較NS組1d、3d、有顯著性差異(P＜0.05，P＜0.01)。AT組較NS組1d時降低(P＜0.05)；比PQ組各相應(yīng)時間點(diǎn)值高，1d、3d、5d組有顯著性差異(P＜0.01)。7d無明顯差異(P＞0.05)。
　　 3.3血漿中GSH活力的變化：NS組時間點(diǎn)值比較無明顯差異。PQ組較NS組各相應(yīng)時間點(diǎn)值明顯降低(P＜0.01)。A組與NS組比較，1d、3d、5d有顯著性差

10、異(P＜0.05，P＜0.01)，7d無明顯差異；比PQ組各相應(yīng)時間點(diǎn)值高，于1d、3d時有顯著性差異(P＜0.01)。
　　 4肺組織病理形態(tài)學(xué)檢查
　　 4.1肉眼觀察，NS組肺臟標(biāo)本呈粉紅色，表面光滑，形態(tài)顏色大小正常。PQ組肺臟呈暗紅色表面濕潤，明顯腫脹瘀血，存在斑片狀或點(diǎn)狀出血，質(zhì)地較實(shí)，切面有粉紅或白色泡沫樣液體滲出。AT組肺體積較PQ組小，肺表面散在出血點(diǎn)，切面滲液減少。
　　 4.2光鏡觀察：NS

11、組肺泡結(jié)構(gòu)完整，肺泡腔無炎癥細(xì)胞及紅細(xì)胞浸潤，肺泡間隔無增寬。中毒后可見肺泡壁毛細(xì)血管擴(kuò)張，充血，水腫，肺泡間隔增寬，肺泡腔內(nèi)漿液，中性粒細(xì)胞及巨噬細(xì)胞滲出，可見灶狀出血及肺泡萎、肺泡腔出血、纖維蛋白滲出；炎性肉芽組織、纖維母細(xì)胞增生、成纖維細(xì)胞增生。應(yīng)用鹽酸氨溴索后肺泡壁毛細(xì)血管瘀血擴(kuò)張、出血、肺泡水腫等均有所減輕。
　　 5.SP-C免疫組化結(jié)果
　　 SP-C主要存在于肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞。
　　 5.1 NS

12、組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞SP-C表答，肺泡腔內(nèi)壁可見細(xì)顆粒狀稀疏分布的的SP-C，小支氣管腔內(nèi)可見一層免疫陽性物質(zhì)沉著。
　　 5.2 PQ組肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞SP-C表達(dá)明顯減弱，塌陷的肺泡腔內(nèi)可見少量呈細(xì)顆粒狀分布SP-C，小支氣管腔內(nèi)可見少量免疫陽性物質(zhì)沉著。
　　 5.3鹽酸氨溴索治療組，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞SP-C表達(dá)明顯較PQ組增強(qiáng)，肺泡腔可見粗顆粒分布的SP-C，小支氣管腔中免疫陽性物質(zhì)明顯增加。
　　 5.4

13、 NS組SP-C陽性細(xì)胞數(shù)各時間點(diǎn)值比較無明顯差異。PQ組SP-C陽性細(xì)胞數(shù)比NS組明顯降低，7d達(dá)最低，與NS組各相應(yīng)時間點(diǎn)值比較均有顯著性差異(P＜0.01)。A組SP-C陽性細(xì)胞數(shù)比NS組降低，1d、3d、5d各相應(yīng)時間點(diǎn)值比較有顯著性差異(P＜0.01)，但7d時無明顯差異；比PQ組各相應(yīng)時間點(diǎn)數(shù)值高，3d、5d組有顯著性差異(P＜0.05、P＜0.01)。
　　 結(jié)論：1腹腔注射PQ造成大鼠百草枯中毒，血漿中MDA含量

14、升高，SOD、GSH活力下降，說明氧化損傷是PQ中毒引起急性肺損傷的原因。
　　 2 PQ中毒后，肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞SP-C表達(dá)減弱，說明肺表面活性物質(zhì)可能在百草枯中毒造成的急性肺損傷中起重要作用。
　　 3大劑量鹽酸氨溴索治療后，肺組織炎癥水腫減輕，MDA含量降低，SOD、GSH水平提高，SP-C表達(dá)增強(qiáng)，表明大劑量鹽酸氨溴索具有一定的抗炎、抗氧化自由基、促進(jìn)肺表面活性蛋白合成及分泌的作用，對于百草枯中毒有一定的治療作用