調(diào)控Wnt信號(hào)通路對(duì)百草枯中毒大鼠肺纖維化影響的研究.pdf

1、目的：
　　探討Wnt信號(hào)通路在百草枯(paraquat，PQ)誘導(dǎo)的大鼠肺纖維化模型中的作用，進(jìn)一步闡明PQ致肺纖維化的機(jī)制，研究調(diào)控Wnt信號(hào)通路對(duì)肺纖維化的影響，為新藥研發(fā)及臨床上治療PQ中毒提供新的思路。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)一：選用SD大鼠36只，隨機(jī)分為對(duì)照組和PQ組，每組18只，PQ組大鼠采用一次性腹腔注射百草枯20mg/Kg，對(duì)照組腹腔給予等量生理鹽水，于第7天、14天、28天各取6只斷頸處死，取肺組織

2、行HE染色、馬松染色、HYP含量，RayBio蛋白芯片技術(shù)檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)情況，Western blot檢測(cè)β-catenin和MMP2的表達(dá)水平，免疫組化檢測(cè)occludin、E-cadherin和α-SMA、vimentin的表達(dá)情況。
　　實(shí)驗(yàn)二：選用SD大鼠54只，隨機(jī)分為對(duì)照組、PQ組、抑制劑組，每組18只，抑制劑組一次性給予腹腔注射百草枯20mg/Kg同時(shí)經(jīng)氣道給予Wnt信號(hào)通路抑制劑DKK1（2mg/kg，100μl

3、 PBS，連續(xù)給藥一周），對(duì)照組和PQ組按實(shí)驗(yàn)一方法處理，于第7天、14天、28天隨機(jī)各取6只取血行血?dú)夥治鰴z查，處死后取肺組織行HE染色、馬松染色、HYP含量測(cè)定，Western blot檢測(cè)β-catenin和MMP2的表達(dá)水平，免疫組化檢測(cè)occludin、E-cadherin和α-SMA、vimentin的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　實(shí)驗(yàn)一：
　　1.PQ組大鼠肺大體標(biāo)本呈點(diǎn)片狀出血灶、大量白色結(jié)節(jié)、質(zhì)地硬。H

4、E染色顯示PQ組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)破壞、肺泡間隔增寬、增厚，馬松染色示大量藍(lán)色纖維條索的沉積，而對(duì)照組正常。
　　2.與對(duì)照組相比，PQ-7d組HYP含量并未增加，PQ-14d組HYP含量明顯增加，并隨著染毒時(shí)間的延長，HYP含量逐漸增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.RayBio蛋白芯片技術(shù)顯示PQ組IL-1β、PDGF、β-catenin、MMP-2和TGF-β1等5種細(xì)胞因子表達(dá)水平異常升高。
　　4.W

5、estern blot顯示PQ-28d肺組織β-catenin和MMP2蛋白表達(dá)明顯增加，免疫組化結(jié)果示occludin、E-cadherin表達(dá)水平下調(diào)，α-SMA、vimentin蛋白表達(dá)水平上調(diào)。
　　實(shí)驗(yàn)二：
　　1.血?dú)夥治鲲@示PQ組PaO2、SpO2明顯下降，PaCO2明顯上升，與PQ組相比，抑制劑組的PaO2、SpO2明顯上升，PaCO2明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　2.HE染色和馬松

6、染色結(jié)果示：與PQ組相比，抑制劑組肺上皮結(jié)構(gòu)破壞較少，肺泡結(jié)構(gòu)較完整、有序，藍(lán)色纖維條索較少沉積。
　　3.與同期PQ組相比，抑制劑組羥脯氨酸含量明顯下降，Western blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)抑制劑組β-catenin和MMP2蛋白表達(dá)明顯下降。
　　4.免疫組化結(jié)果示：與PQ組相比，抑制劑組上皮標(biāo)記物occludin、E-cadherin表達(dá)水平上升，成纖維標(biāo)記物α-SMA、vimentin蛋白表達(dá)水平有所下降。
　　結(jié)