小鼠模型感染大片形吸蟲研究平臺初探.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、片形吸蟲病主要侵害宿主的肝膽系統(tǒng),且該病早期診斷困難,即便后期用藥驅(qū)除了蟲體,對肝臟造成的損傷也較難修復(fù)。因此探明大片形吸蟲感染后肝臟損傷的相關(guān)機(jī)制,對豐富大片形吸蟲和宿主之間的相互作用機(jī)制及感染宿主的肝臟治療和康復(fù)具有極其重要的意義。本研究內(nèi)容包括:大片形吸蟲囊蚴實驗室繁育方案的優(yōu)化完善,大片形吸蟲-昆明小鼠感染模型的建立以及感染昆明小鼠肝臟病理學(xué)的初步研究;這些研究旨在為大片形吸蟲肝臟免疫和組織損傷修復(fù)等下游研究夯實基礎(chǔ)。
 

2、 首先完善優(yōu)化實驗室人工培養(yǎng)大片形吸蟲囊蚴體系,并對大片形吸蟲在中間宿主體內(nèi)的發(fā)育特點(diǎn)進(jìn)行觀察。分別以1,3,7條毛蚴感染2~3mm,5~7mm兩種體型大小的小土蝸螺,在室溫26℃時,感染后10~17天可見母雷蚴,28天可見子雷蚴體內(nèi)充滿尾蚴,30~33天可見尾蚴釋放并結(jié)囊為囊蚴。對比分析不同大小的螺感染不同數(shù)量的毛蚴最后產(chǎn)囊蚴率結(jié)果,得出最佳培養(yǎng)方案與肝片形吸蟲囊蚴培養(yǎng)不同,大片形吸蟲囊蚴培養(yǎng)選用3~5mm大小的螺,每螺感染3條毛蚴時

3、產(chǎn)囊蚴量最多。
  以5、15、30和50個囊蚴經(jīng)口感染小鼠,于不同時期分別剖檢以觀察蟲體分布、回收、發(fā)育情況,以及肝臟的病理變化。結(jié)果顯示:感染后5天內(nèi)便可在肝實質(zhì)探查到蟲體,35~42天內(nèi)童蟲完成從肝實質(zhì)向膽管移行,但各感染組均未發(fā)現(xiàn)成蟲;大片形吸蟲在昆明小鼠體內(nèi)異位寄生現(xiàn)象發(fā)生頻率較高,肺部、口腔、膈肌、前肢皮下等部位均可發(fā)現(xiàn)蟲體;受感染昆明小鼠肝臟可見彌散出血、化膿、脂變、纖維化、壞死、硬變等明顯肉眼病理變化,病變程度隨感

4、染強(qiáng)度的增加而加重。表明大片形吸蟲-昆明小鼠模型適宜用于童蟲期的研究,15個囊蚴的感染強(qiáng)度是動態(tài)觀察昆明小鼠宿主狀態(tài)及相關(guān)研究的適宜感染劑量;小鼠為大片形吸蟲的非適宜宿主,不宜作為研究反芻動物(適宜宿主)感染大片形吸蟲動物模型。
  觀察人工感染大片形吸蟲小鼠的肝臟組織學(xué)病理變化顯示:感染后7天,肝臟肉眼可見輕微損傷,HE染色可見肝細(xì)胞排列開始紊亂;感染后21~42天,肝臟損失逐漸加重,顯微鏡下可觀察到肝細(xì)胞壞死、結(jié)締組織增生、炎

5、性細(xì)胞的增生浸潤等典型的肝組織病理學(xué)改變。檢測感染大片形吸蟲的小鼠血清中堿性磷酸酶(ALP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLOB)及白球比(A/G)的變化,顯示AST在感染后第3天開始升高,21~56天顯著升高(P<0.01),49天達(dá)峰值;ALT于感染后14天開始升高,21~35天開始顯著升高(P<0.01),49天達(dá)峰值;ALP呈現(xiàn)感染后14~21天升高,35~49天下降,

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