OSAS模式間歇低氧大鼠PMN凋亡及與血管內(nèi)皮細(xì)胞交互影響機(jī)制的研究.pdf

1、OSAS是一種以慢性間歇低氧(CIH)為核心病理生理學(xué)基礎(chǔ)伴發(fā)心、腦血管等多系統(tǒng)損傷的慢性疾病。CIH可以誘發(fā)一系列炎癥-氧化應(yīng)激反應(yīng)和機(jī)體細(xì)胞凋亡周期的改變，影響細(xì)胞功能及與周邊細(xì)胞間的相互作用，導(dǎo)致器官損傷及功能異常。血管內(nèi)皮損傷是OSAS相關(guān)血管性疾病如高血壓、冠心病、腦卒中等的基本病理損傷基礎(chǔ)。外周血細(xì)胞是和血管內(nèi)皮細(xì)胞接觸及相互作用最主要的體液成分。PMN是重要的炎癥細(xì)胞，其生存周期、功能狀態(tài)及與血管內(nèi)皮細(xì)胞的交互作用直接影響

2、血管內(nèi)皮的功能。本研究從不同間歇低氧暴露時(shí)間對(duì)PMN凋亡及其以不同方式與血管內(nèi)皮細(xì)胞相互作用對(duì)細(xì)胞間粘附和內(nèi)皮凋亡的影響和抗氧化劑Tempol干預(yù)的角度進(jìn)一步探討OSAS相關(guān)血管性并發(fā)癥的病理生理機(jī)制，從另一視角為OSAS的臨床診療提供新的策略和試驗(yàn)依據(jù)。
　　內(nèi)容
　　1.研究不同間歇低氧暴露時(shí)間對(duì)大鼠PMN凋亡的影響
　　2.研究間歇低氧大鼠PMN與血管內(nèi)皮細(xì)胞在直接共培養(yǎng)與transwell間接共培養(yǎng)相互作用下，

3、對(duì)細(xì)胞間粘附指標(biāo)ICAM-1、E-選擇素濃度及內(nèi)皮細(xì)胞凋亡指標(biāo)bcl-2/bax、caspase-3的影響及抗氧化劑Tempol的干預(yù)效果
　　方法
　　第一部分:48只成年雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為常氧(NIH)和間歇低氧(IH)4周組、6周組、8周組，每組8只;暴露結(jié)束，腹主動(dòng)脈取血，雙層Ficoll-Histopaque雙密度梯度離心法分離PMN。流式細(xì)胞技術(shù)Annexin-V和7-AAD雙標(biāo)法檢測(cè)PMN凋亡率。

4、r>　　第二部分:32只大鼠隨機(jī)分為NIH組、IH組、間歇低氧生理鹽水干預(yù)組(IHN組)、間歇低氧Tempol干預(yù)組（IHT組），暴露6周后腹主動(dòng)脈取血分離PMN，分別與大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞行直接共培養(yǎng)和transwell間接共培養(yǎng)4小時(shí)，ELISA法測(cè)定上清液ICAM-1和E-選擇素濃度;內(nèi)皮細(xì)胞分為:與NIH組PMN直接共培養(yǎng)內(nèi)皮(NIHE)組和間接共培養(yǎng)內(nèi)皮（T-NIHE）組，與IH組PMN直接共培養(yǎng)內(nèi)皮(IHE)組和間接共培養(yǎng)內(nèi)皮

5、(T-IHE)組，與IHN組PMN直接共培養(yǎng)內(nèi)皮(IHNE)組和間接共培養(yǎng)內(nèi)皮（T-IHNE）組和與IHT組PMN直接共培養(yǎng)內(nèi)皮(NIHE)組和間接共培養(yǎng)內(nèi)皮（T-NIHE）組，免疫印記(Western blot)法測(cè)定內(nèi)皮細(xì)胞bcl-2、bax、caspase-3表達(dá)。
　　結(jié)果
　　第一部分:
　　1.IH組大鼠PMN凋亡率低于NIH組:4周NIH組vs IH組(22.35±2.26 vs16.23±3.00; P

6、＜0.05);6周NIH組vs IH組（23.56±1.26 vs16.71±1.97;P＜0.05）;8周NIH組vs IH(25.48±1.93 vs20.16±1.11;P＜0.05)。
　　2.隨著IH時(shí)間的延長，PMN凋亡率有上升趨勢(shì):NIH組4周、6周、8周組間存在差異(F=4.297，P=0.033)，8周組高于4周組(P=0.011)，IH組4周、6周、8周組間存在差異(F=5.845，P=0.013)，8周組高于

7、4周組(P=0.007)和6周組(P=0.015)。
　　第二部分:
　　1.大鼠PMN與大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(直接共培養(yǎng))對(duì)細(xì)胞間粘附和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響
　　1)直接共培養(yǎng)上清液ICAM-1濃度升高，IHE組、IHNE組(P＜0.001)和IHTE組(P=0.023)高于NIHE組;E-選擇素濃度升高，IHE組、IHNE組(P＜0.001)高于NIHE組，IHTE組低于IHE組（P＜0.001）和IHNE組，與NIH

8、E組無差別(P=0.557)
　　2)直接共培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞Bcl-2表達(dá)增加，IHE組、IHNE組(p＜0.001)和IHTE組(P=0.029)高于NIHE組;Bax表達(dá)增高，IHE組、IHNE組(P＜0.001)高于NIHE組;Bcl-2/Bax比值降低，IHE組、IHNE組(P＜0.001)和IHTE組(P=0.014)低于NIHE組;Caspase-3表達(dá)升高，IHE組、IHNE組(P＜0.001)高于NIHE組，
　

9、　2.大鼠PMN與大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞(transwell間接共培養(yǎng))對(duì)細(xì)胞間粘附和內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響
　　1)transwell下室上清液ICAM-1、E選擇素濃度升高，T-IHE組、T-IHNE組高于T-NIHE組(P＜0.001)，T-IHTE組低于T-IHE組和T-IHNE組(P＜0.05)，與T-NIHE組無差別(P＞0.05)
　　2)間接共培養(yǎng)內(nèi)皮細(xì)胞Bcl-2表達(dá)增加，T-IHE組(P=0.001)和T-IHN

10、E組（P＜0.0001）高于T-NIHE組，T-IHTE組與T-NIHE組無差別(P=0.649); Bax表達(dá)增加，T-IHE組、T-IHNE組（P＜0.0001）和T-IHTE組（P=0.009）高于T-NIHE組;Bcl-2/Bax比值降低，T-IHE組、T-IHNE組（P＜0.0001）和T-IHTE組（P=0.001）低于T-NIHE組;Caspase-3表達(dá)增高，T-IHE組、T-IHNE組(P＜0.0001)高于T-NIH

11、E組，T-IHTE與T-NIHE組無差別(P=0.602)
　　3.直接共培養(yǎng)組的ICAM-1、E選擇素、Bcl-2、Bax、Caspase-3均高于間接共培養(yǎng)組，P均＜0.05; Bcl-2/Bax比值低于間接共培養(yǎng)組，P均＜0.05
　　結(jié)論
　　1.不同間歇低氧暴露時(shí)間均會(huì)引起PMN凋亡延遲;隨著間歇低氧暴露時(shí)間的延長，PMN凋亡有增加趨勢(shì)。
　　2.間歇低氧大鼠PMN與內(nèi)皮細(xì)胞直接共培養(yǎng)與間接共培養(yǎng)均可引