溫潤通絡(luò)方對糖尿病大鼠大血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：溫潤通絡(luò)方（由仙靈脾、桂枝、木瓜、白芍、生地黃、女貞子、旱蓮草、川芎、地龍、蜈蚣、五靈脂、生蒲黃等藥物組成）具有溫通經(jīng)絡(luò)，養(yǎng)陰潤燥，活血化瘀之功效，為導(dǎo)師經(jīng)臨床觀察篩選的效方，對糖尿病大血管并發(fā)癥具有較好的治療效果。為了進一步探討其作用機理，參照相關(guān)文獻制造糖尿病大鼠動物模型，同時施加藥物干預(yù)，觀察了其對糖尿病大鼠大血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡及相關(guān)調(diào)控基因的影響，探討了其抗細(xì)胞凋亡、保護大血管內(nèi)皮的作用機制，并運用HE染色方法觀察了本方對大

2、血管內(nèi)皮組織形態(tài)學(xué)的影響。
　　 方法：選用SD雄性大鼠50只，體重200～220g。大鼠自由飲水進食，飼養(yǎng)于18℃～22℃明暗各12小時的清潔級動物實驗室內(nèi)。正常喂養(yǎng)1周后，隨機分為5組：正常對照組（N）、模型對照組（M）、溫潤通絡(luò)方高劑量組（H）、溫潤通絡(luò)方低劑量組（L）、陽性藥（血府逐瘀湯）對照組（X）。參照相關(guān)文獻，除正常對照組外，其它各組大鼠腹腔注射1％鏈脲佐菌素枸櫞酸緩沖液（枸櫞酸緩沖液為0.1mmol/L，pH4.

3、5），按55mg/kg體重劑量一次性腹腔注射造模，72h后斷尾取血測定血糖值，凡血糖值大于16.7mmol/L，大鼠尿量及飲水量明顯增多，則造模成功。正常對照組大鼠腹腔注射相應(yīng)體積的1％枸櫞酸緩沖液。溫潤通絡(luò)方高、低劑量組以及血府逐瘀湯對照組，并用相應(yīng)藥物灌胃治療，每天1次，共灌胃8周。正常對照組和模型對照組給予生理鹽水灌胃，每天1次，每次用量體積均按1ml/100g體重計算，共灌胃8周。于末次灌胃后禁食不禁水12h，2％戊巴比妥鈉腹腔

4、注射麻醉后取材制作標(biāo)本。HE染色，光鏡下觀察大血管內(nèi)皮組織形態(tài)學(xué)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.一般行為觀察
　　 實驗期間，正常組生長良好，飲食正常，反應(yīng)靈敏，體重增長明顯。模型組大鼠很快出現(xiàn)多飲，多食，多尿，形體逐漸消瘦，皮毛凌亂，色枯無澤，甚至有少量脫落，蜷臥扎堆，活動減少，精神萎靡等表現(xiàn)。溫潤通絡(luò)方高、低劑量組及血府逐瘀湯對照組大鼠情況均較模型組為輕。
　　 2.溫潤通絡(luò)方對實驗性糖尿病大鼠大血管

5、內(nèi)皮組織形態(tài)學(xué)的影響
　　 結(jié)果顯示，正常組細(xì)胞紋理清晰，走形正常，胞漿著色均勻，動脈內(nèi)皮細(xì)胞扁平，內(nèi)膜平坦，中膜平滑肌細(xì)胞（smooth muscle cell，SMC）與彈力板平行相間排列。模型組大鼠動脈壁出現(xiàn)局限性內(nèi)膜增厚，中膜淺層平滑肌細(xì)胞（SMC）可見增生、排列紊亂，病灶處的彈力板呈波浪狀或交織狀排列，有斷裂分離現(xiàn)象。溫潤通絡(luò)方高、低劑量組及血府逐瘀湯對照組的組織形態(tài)變化均比模型組有明顯減輕。
　　 3.溫潤通

6、絡(luò)方對實驗性糖尿病大鼠血液流變學(xué)的影響
　　 3.1各組大鼠血漿黏度比較：
　　 與正常組血漿黏度（1.48±0.99）比較，模型組（2.11±0.25），各治療組（1.81±0.84）、（1.98±0.11）、（1.95±0.07）均明顯增加（P<0.01）；與模型組比較，各治療組血漿黏度均明顯降低（P<0.01或P<0.05）。
　　 3.2各組大鼠全血高切還原黏度比較：
　　 與正常組全血高切還原黏

7、度（4.19±0.36）比較，模型組（7.57±0.28），各治療組（6.11±0.22）、（6.51±0.26）、（6.49±0.34）均明顯增加（P<0.01）；與模型組比較，各治療組全血高切還原黏度均明顯降低（P<0.01）。
　　 3.3各組大鼠全血低切還原黏度比較：
　　 與正常組全血低切還原黏度（9.37±1.93）比較，模型組（18.53±1.49），各治療組（14.39±1.03）、（16.30±1.47

8、）、（16.08±1.47）均明顯增加（P<0.01）；與模型組比較，各治療組全血低切還原黏度均明顯降低（P<0.01）。
　　 3.4各組大鼠纖維蛋白原比較：
　　 與正常組纖維蛋白原（2.25±0.19）比較，模型組（3.47±0.20），各治療組（2.89±0.27）、（3.27±0.18）、（3.11±0.12）均明顯增加；與模型組比較，各治療組纖維蛋白原均明顯降低。
　　 4.溫潤通絡(luò)方對實驗性糖尿病大

9、鼠大血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率的影響
　　 正常組比較，模型組大鼠股動脈內(nèi)皮和主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率顯著高于正常組（P<0.05）。經(jīng)藥物干預(yù)后，各治療組與模型組比較，細(xì)胞凋亡率均明顯減小，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。其中，溫潤通絡(luò)方低劑量組細(xì)胞凋亡率高于高劑量組，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而血府逐瘀湯對照組與低劑量組比較無明顯差異（P>0.05）。
　　 5.溫潤通絡(luò)方對實驗性糖尿病大鼠大血管內(nèi)皮Bcl-2和Bax

10、蛋白表達的影響
　　 與正常組比較，模型組大鼠股動脈內(nèi)皮和主動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡明顯增高（P<0.01），Bcl-2/Bax比值顯著下降（P<0.05），Bcl-2蛋白表達顯著降低，而Bax蛋白表達增加，差別有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。經(jīng)用藥干預(yù)后，溫潤通絡(luò)方高、低劑量組和血府逐瘀湯對照組與模型組比較，Bcl-2蛋白表達、Bcl-2/Bax比值顯著增大（P<0.05），Bax蛋白表達顯著下降（P<0.05）。說明Bcl-2蛋白表達

11、量增加則細(xì)胞凋亡率降低，而Bax蛋白表達量增加則細(xì)胞凋亡率增加。各用藥治療組中，高劑量組Bcl-2蛋白表達和Bcl-2/Bax比值均高于低劑量組（P<0.05）；低劑量組與血府逐瘀湯對照組之間各項指標(biāo)無明顯差異（P>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1.溫潤通絡(luò)方可降低糖尿病大鼠血漿黏度，降低全血高切還原黏度，降低全血低切還原黏度，降低纖維蛋白原，降低血漿甘油三酯，抑制血栓形成。
　　 2.溫潤通絡(luò)方可明顯改善糖