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文檔簡介
1、人類免疫缺陷病毒(HIV)引起的獲得性免疫缺陷綜合征(艾滋病)是人類歷史上最嚴重、最致命的疾病之一。艾滋病目前仍然不能治愈。HIV編碼的整合酶(IN)介導病毒DNA與宿主細胞基因組整合,是病毒復制所必需的關鍵酶之一,抑制IN的功能能夠有效阻斷病毒在宿主細胞內(nèi)的復制。同時,由于正常人體細胞中沒有IN的功能類似物,特異性作用于IN的抑制劑對人體的副作用可能很小,被認為是抗HIV藥物研發(fā)的理想靶點。目前,IN抑制劑篩選主要以鏈轉(zhuǎn)移反應為靶標。
2、
本研究使用Overlap PCR合成了HIV-1 HXB2CG IN的基因序列,并引入了F185K/C280S可溶性突變以提高蛋白溶解性。將目的基因連接到pET28a表達載體中,在大腸桿菌BL21中實現(xiàn)了高效且可溶性表達。通過親和層析的方法,從細胞破碎上清液中純化到重組IN蛋白。應用文獻報道的高通量ELISA鑒定了重組IN蛋白的鏈轉(zhuǎn)移反應活性,證明了重組IN蛋白具有鏈轉(zhuǎn)移反應活性。
應用三個參數(shù)評價并證明了
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