糖基化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在骨缺損模型中靶向遷移能力的探究.pdf

1、目的：探究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BM-MSCs)經(jīng)過(guò)糖基化修飾后向損傷組織靶向遷移能力的改變情況；通過(guò)體外對(duì)比檢測(cè)普通BM-MSCs和糖基化的BM-MSCs在配體形成、與選擇素結(jié)合能力等方面的差異，最終在骨缺損模型中對(duì)比普通BM-MSCs與糖基化的BM-MSCs向骨缺損處的靶向遷移情況，為骨缺損的治療奠定一定的實(shí)驗(yàn)理論基礎(chǔ)。
　　方法：首先選用1只新西蘭兔，2個(gè)月齡，體質(zhì)量1.5Kg，抽提骨髓，體外分離、培養(yǎng)、擴(kuò)增BM-MSCs；免疫

2、組織化學(xué)法及成骨誘導(dǎo)法鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞；一部分BM-MSCs運(yùn)用脂質(zhì)體法將含有α-1,3巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶VI（FUT-6）基因的質(zhì)粒（pcDNA3.1）轉(zhuǎn)染BM-MSCs（實(shí)驗(yàn)組），另一部分則未轉(zhuǎn)染FUT-6基因（對(duì)照組）；通過(guò)抗性篩選試劑（G418）篩選實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞后建立穩(wěn)定表達(dá)FUT-6的BM-MSCs細(xì)胞株（FUT-6/BM-MSCs）。Elisa法檢測(cè)BM-MSCs和FUT-6/BM-MSCs的FUT-6表達(dá)量及唾液酸化路易斯寡糖（

3、sLeX）的生成量；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)BM-MSCs和FUT-6/BM-MSCs與E-選擇素、P-選擇素的結(jié)合能力；BM-MSCs和FUT-6/BM-MSCs于體外用eGFP標(biāo)記；12只新西蘭兔尺骨缺損造模（缺損程度1.5～2.0cm）后分為2組（每組6只）后通過(guò)靜脈分別回輸標(biāo)記細(xì)胞于兩組同質(zhì)骨缺損動(dòng)物模型體內(nèi)，術(shù)后6、12、24h用熒光顯微鏡觀察骨缺損處髓腔組織中熒光細(xì)胞數(shù)量，評(píng)估各組熒光細(xì)胞的靶向遷移情況。
　　結(jié)果：BM-MS

4、Cs易于從骨髓液中分離提取，并能夠在體外培養(yǎng)、擴(kuò)增；FUT-6/BM-MSCs可高表達(dá)FUT-6并上調(diào)sLeX結(jié)構(gòu)的生成，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)顯示：FUT-6/BM-MSCs相較BM-MSCs與E-選擇素結(jié)合力由15.0％提高至68.9%；與P-選擇素結(jié)合力由12.7%提高至59.7%；術(shù)后6、12、24h熒光顯微鏡觀察FUT-6/BM-MSCs均較BM-MSCs在骨缺損處髓腔組織中數(shù)量更多，差異均有統(tǒng)計(jì)