異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中TRPV1在子宮內(nèi)膜異位癥致痛中作用的研究.pdf

1、內(nèi)膜異位癥是一種常見的、良性、雌激素依賴的慢性婦科疾病。盆腔內(nèi)異癥在婦女中的發(fā)病率為6-10％，在患不孕或疼痛的婦女中發(fā)病率高達(dá)35-50％。疼痛是內(nèi)異癥的主要臨床表現(xiàn)之一，如痛經(jīng)、深部性交痛、便痛和慢性盆腔痛等。因?yàn)樵摬〈萍に匾蕾嚨奶匦?，現(xiàn)在常用的GnRHa一般對(duì)內(nèi)異癥引起的疼痛是有效的，但該藥用藥時(shí)間有限，且在許多嚴(yán)重疼痛的病例，用藥時(shí)疼痛癥狀都可能復(fù)發(fā)。
　　 TRPV1(Transient Receptor Potent

2、ial Vanilloid Type1，TRPV1)是傷害性感受器上的配體門控的非選擇性陽(yáng)離子通道，是瞬時(shí)感受器電位(transientreceptor potential，TRP)家族的成員。TRPV1在傷害痛覺感受中的作用已經(jīng)被TRPV1基因敲除的小鼠證實(shí)，例如TRPV1敲除的小鼠不能表現(xiàn)氮芥油或完全Freund's佐劑介導(dǎo)的炎癥引起的痛覺過敏，這些都提示TRPV1對(duì)炎癥痛覺傷害感受中的必須作用。
　　 TRPV1與痛覺的發(fā)

3、生、傳導(dǎo)及敏化在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中已進(jìn)行了大量的研究，而內(nèi)異癥病灶中是否存在TRPV1及其具體功能尚未見諸報(bào)道。本課題根據(jù)內(nèi)異癥疼痛的炎性特征，在內(nèi)異癥所致痛覺發(fā)生的源頭探討疼痛可能發(fā)生的原因。
　　 第一部分
　　 TRPV1在內(nèi)異癥中的表達(dá)
　　 目的：檢測(cè)TRPV1在內(nèi)異癥中的表達(dá)并分析其與內(nèi)異癥患者疼痛嚴(yán)重程度的相關(guān)性。
　　 方法：選取2007-2009年在復(fù)旦大學(xué)婦產(chǎn)科醫(yī)院因內(nèi)異癥進(jìn)行手術(shù)的68例

4、患者的異位內(nèi)膜和24例正常對(duì)照的子宮內(nèi)膜，用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)內(nèi)異癥患者異位內(nèi)膜和正常對(duì)照內(nèi)膜中TRPV1的表達(dá)，用免疫熒光的方法檢測(cè)內(nèi)異癥患者異位內(nèi)膜中TRPV1表達(dá)的神經(jīng)纖維。
　　 結(jié)果：1.TRPV1在異位內(nèi)膜中的表達(dá)高于正常內(nèi)膜(P<0.05)；TRPV1在內(nèi)異癥患者中主訴無(wú)痛和不同程度的疼痛組間差異是有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的(P<0.05)；異位內(nèi)膜中TRPV1的表達(dá)與患者疼度程度相關(guān)(P<0.05)。
　　 2.

5、內(nèi)異癥患者異位灶中TRPV1表達(dá)的神經(jīng)纖維在無(wú)痛和有疼痛主訴的患者中檢出率分別為26.3％和53.1％，而且隨著疼痛程度的增加，檢出率也是增加的；TRPV1表達(dá)的神經(jīng)纖維密度(x±SD/mm2)在無(wú)痛和有痛組中分別為0.2±0.12和0.4±0.27，而且隨著疼痛程度的增加，其密度也相應(yīng)增加。
　　 結(jié)論：TRPV1在異位內(nèi)膜中的表達(dá)和TRPV1陽(yáng)性的神經(jīng)纖維都隨著疼度程度的升高而增加。
　　 第二部分
　　 P

6、GE2和TNF-α對(duì)TRPV1在原代培養(yǎng)的異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的影響
　　 目的：內(nèi)異癥是一種炎性疾病。內(nèi)異癥患者腹腔中巨噬細(xì)胞和多形核白細(xì)胞激活介導(dǎo)PGE2和細(xì)胞因子的產(chǎn)生。多個(gè)研究發(fā)現(xiàn)致炎細(xì)胞因子、前列腺素、趨化因子、NO等是與疼痛程度相關(guān)的。PGE2和TNF-α在內(nèi)異癥患者腹腔液或卵巢內(nèi)膜樣囊腫的囊液中濃度是升高的。在前一部分實(shí)驗(yàn)中我們發(fā)現(xiàn)TRPV1在異位病灶中的表達(dá)是高于正常內(nèi)膜的，本部分實(shí)驗(yàn)檢測(cè)內(nèi)異癥中常見的致炎因子

7、是否能影響TRPV1在異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)。
　　 方法：原代培養(yǎng)異位的子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞。用PGE2(10-8M)和TNF-α(1uM)處理異位基質(zhì)細(xì)胞，用RT-Realtime PCR和Western Blot的方法分別檢測(cè)TRPV1mRNA和蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：在PGE2和TNF-α的刺激下，異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中TRPV1 mRNA和蛋白的表達(dá)都明顯升高。
　　 結(jié)論：致炎因子PGE2和TNF-α

8、可以刺激異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中TRPV1表達(dá)的升高。
　　 第三部分
　　 內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中TRPV1通道的電生理學(xué)特性和功能研究
　　 目的：對(duì)神經(jīng)元細(xì)胞中TRPV1通道的電生理學(xué)特性和其在痛覺中的作用已經(jīng)進(jìn)行了大量的研究，而這一切對(duì)異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中的TRPV1還未見諸報(bào)道。本部分對(duì)異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞膜上TRPV1通道的基本電生理學(xué)特性和痛覺相關(guān)的一些功能進(jìn)行了初步研究。
　　 方法：原代培養(yǎng)異位和正常的子宮

9、內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞。用膜片鉗記錄TRPV1的特異性激動(dòng)劑辣椒素(capsaicin，CAP)對(duì)基質(zhì)細(xì)胞膜電流的影響。用鈣成像的方法檢測(cè)capsaicin對(duì)內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度([Ca2+])的影響，檢測(cè)PGE2預(yù)處理對(duì)capsaicin引起異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化的影響。用NO檢測(cè)試劑盒和elisa試劑盒分別檢測(cè)capsaicin對(duì)異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞分泌致痛相關(guān)因子NO和IL-1β的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1

10、.膜片鉗檢測(cè)發(fā)現(xiàn)capsaicin(1uM)可以激發(fā)異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生外向型膜電流，且沒有脫敏現(xiàn)象。
　　 2.鈣成像發(fā)現(xiàn)辣椒素(1uM)灌流可以明顯的降低細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]濃度，沖洗后細(xì)胞內(nèi)[Ca2+]可以恢復(fù)；異位基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Ca2+外流的幅度要高于正常對(duì)照的基質(zhì)細(xì)胞(n=10)；PGE2(1uM)可以增加異位內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞中capsaicin引起的Ca2+的外流(n=10)(P均<0.05)。
　　 3.Capsai