非酒精性脂肪性肝炎大鼠內(nèi)毒素血癥與腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡關(guān)系的研究.pdf

1、非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是指除乙醇，肝炎病毒，藥物等其他明確的肝損傷因素外，以彌漫性肝臟脂質(zhì)蓄積，伴或不伴炎癥為主要病理特征的一系列疾病的統(tǒng)稱，包括單純性脂肪肝，非酒精性脂肪性肝炎，肝纖維化，肝硬化，肝細(xì)胞癌，另外還包括一些嚴(yán)重并發(fā)癥如急性肝衰竭等。非酒精性脂肪性肝病目前已經(jīng)成為發(fā)達(dá)國(guó)家慢性肝病以及隱源性肝硬化的主要病因，其發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)逐年增長(zhǎng)的趨勢(shì)。單純

2、性脂肪肝是一個(gè)可逆的過(guò)程，而非酒精性脂肪性肝炎則是單純性脂肪肝發(fā)展為肝硬化的必經(jīng)途徑，研究非酒精性脂肪性肝炎的發(fā)病機(jī)制并阻礙其向肝硬化過(guò)程發(fā)展過(guò)程是目前亟不可待的任務(wù)。
　　近年來(lái)，腸源性內(nèi)毒素血癥引發(fā)肝細(xì)胞一系列炎癥打擊損傷的研究越來(lái)越炙手可熱，在單純性脂肪肝進(jìn)展為肝炎過(guò)程中扮演著重要角色。腸源性內(nèi)毒素血癥的發(fā)生與各種因素相關(guān)，各種原因引起的腸道菌群失調(diào)，腸道細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)，腸粘膜屏障功能損傷，最終導(dǎo)致細(xì)菌移位形成腸源性內(nèi)毒素血癥

3、。革蘭氏陰性桿菌細(xì)胞壁的主要成分LPS是腸源性內(nèi)毒素的主要成分，經(jīng)肝臟枯否細(xì)胞的模式識(shí)別受體識(shí)別后介導(dǎo)LPS-CD14-TLR4信號(hào)通路誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子包括TNF-α、IL-6等的大量表達(dá)，造成肝臟損傷。腸粘膜屏障功能損傷的早期表現(xiàn)即為腸粘膜通透性的增高，腸粘膜通透性作為聯(lián)系腸道毒素與肝臟的橋梁起了至關(guān)重要的作用。腸粘膜通透性改變與許多疾病相關(guān)，如酒精性脂肪性肝病，炎癥性腸病，急性胰腺炎，慢性腎功能衰竭，肺間質(zhì)纖維化等，非酒精脂肪性肝病

4、也有相關(guān)文獻(xiàn)。酒精直接損傷，氧化應(yīng)激，腸道缺血再灌注等許多因素均能打破腸粘膜細(xì)胞凋亡和增殖之間的相互平衡，引起腸道上皮細(xì)胞凋亡增加，細(xì)胞間緊密連接完整性破壞等造成腸粘膜通透性增加，近年來(lái)關(guān)于酒精性肝病，炎癥性腸病等腸道上皮凋亡與腸道通透性的研究越來(lái)越多，但關(guān)于非酒精性脂肪性肝炎腸道上皮細(xì)胞凋亡的研究還比較少，因此本實(shí)驗(yàn)研究非酒精性脂肪性肝炎大鼠內(nèi)毒素的形成是否與腸粘膜上皮細(xì)胞凋亡及腸粘膜通透性有關(guān)。
　　目的:應(yīng)用高脂飲食構(gòu)建大鼠

5、非酒精性脂肪性肝炎模型，測(cè)定末端回腸上皮細(xì)胞凋亡水平、腸粘膜通透性水平和血清內(nèi)毒素的水平，了解它們之間的相關(guān)性。
　　方法:雄性Sprague-Dawley大鼠20只，平均體重為180±20g，自由喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為2組:①對(duì)照組10只，給予標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng);②模型組10只，給予高脂飼料喂養(yǎng)（88％普通飼料+2％膽固醇+10％豬油）;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物均分籠飼養(yǎng)于25±2℃、明暗各12h的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)，自由進(jìn)食和飲水。每周記錄動(dòng)物體重1次，

6、連續(xù)進(jìn)行至24周末，處死所有大鼠。
　　完整切除肝臟，觀察肝臟的大體情況，稱取肝臟濕重;采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和甘油三酯(TG)水平;采用鱟試劑法測(cè)定血清內(nèi)毒素水平;HE染色觀察肝臟組織和末端回腸黏膜病理學(xué)變化，并對(duì)肝臟組織進(jìn)行NAS炎癥積分;采用分光光度法測(cè)定血清D-乳酸水平;制作末端回腸組織石蠟切片應(yīng)用TUNEL方法測(cè)定腸道上皮細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:①喂飼24周末時(shí)，大

7、鼠肝組織HE染色結(jié)果顯示:模型組大鼠出現(xiàn)明顯的肝細(xì)胞脂肪變、氣球樣變和部分炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，證實(shí)了給予高脂飲食成功建立了非酒精性脂肪性肝炎大鼠模型。②大鼠體重、肝濕重和肝指數(shù)(肝濕重/體重×100％):24周末稱重，模型組大鼠的體重、肝重、肝指數(shù)較對(duì)照組均明顯增高（567.60±18.89vs460.71±14.71，19.68±2.68vs11.53±0.98，3.47±0.43vs2.5±0.12，P＜0.05）。③血清生化指標(biāo):模型組

8、血清ALT，AST，TG水平較對(duì)照組水平明顯增高(103.44±8.41vs39.10±9.37，276.95±25.06vs145.37±15.19，0.93±0.14vs0.54±0.10，P＜0.05)。④模型組血清內(nèi)毒素水平較對(duì)照組相比顯著增高（0.3600±0.0293vs0.1747±0.0121，P＜0.05）。⑤血清D-乳酸水平:模型組大鼠血清D-乳酸水平較對(duì)照組相比顯著增高(0.375±0.0353vs0.182±0.

9、0107，P＜0.05)。⑥肝臟組織病理學(xué)特點(diǎn):對(duì)照組大鼠未見(jiàn)肝細(xì)胞脂肪變或氣球樣變，少數(shù)大鼠肝組織光鏡下可見(jiàn)少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn);模型組大鼠肝細(xì)胞內(nèi)均可見(jiàn)充滿大量脂肪空泡，肝細(xì)胞氣球樣變，亦可見(jiàn)到程度不等的小葉內(nèi)炎細(xì)胞浸潤(rùn)，匯管區(qū)炎細(xì)胞浸潤(rùn)和點(diǎn)灶狀壞死，NAS積分與正常組相比有顯著性差異（6.90±0.57 vs0.70±0.48，P＜0.05）。⑦末端回腸粘膜病理學(xué)改變:對(duì)照組大鼠末端回腸黏膜各層結(jié)構(gòu)完整，絨毛排列整齊緊密有序，上皮細(xì)胞

10、形態(tài)未見(jiàn)明顯異常，未見(jiàn)黏膜充血水腫或炎性細(xì)胞浸潤(rùn);模型組大鼠末端回腸小腸絨毛疏松，部分萎縮，斷裂缺損，黏膜上皮細(xì)胞脫落，粘膜層部分可見(jiàn)水腫和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。⑧末端回腸上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)模型組較對(duì)照組相比明顯增高（0.609±0.071 vs0.407±0.037，P＜0.05）。⑨earson's相關(guān)性分析分析上皮細(xì)胞凋亡指數(shù)與血清D-乳酸沒(méi)有顯著正相關(guān)，有一定相關(guān)性，r=0.488;凋亡指數(shù)與血清內(nèi)毒素水平有一定相關(guān)性，r=0.397;血