酪氨酸磷酶SHP2(PTPN11)在乳腺癌中的生物學(xué)功能及結(jié)構(gòu)基礎(chǔ).pdf

1、目的:乳腺癌是威脅女性身心健康的最常見的惡性腫瘤之一,在所有導(dǎo)致女性死亡的腫瘤中位居第二。近年來其發(fā)病率呈快速上升的趨勢,且發(fā)病年齡趨于年輕化。蛋白酪氨酸磷酸酶SHP2(PTPN11)是酪氨酸磷酸酶家族(PTPs)中的重要成員,也是目前該家族中唯一被證實(shí)的原癌基因。近年來研究發(fā)現(xiàn)SHP2常高表達(dá)于包括乳腺癌在內(nèi)的許多人類實(shí)體瘤中,且在部分乳腺癌患者群體中存在點(diǎn)突變,提示SHP2可能與乳腺癌的發(fā)生及惡化具有密切的相關(guān)性,但具體調(diào)控機(jī)理仍不

2、清楚。SHP2分子包含1個(gè)的PTP磷酸酶活性區(qū)域及2個(gè)SH2結(jié)構(gòu)域(N-SH2,C-SH2),結(jié)構(gòu)位點(diǎn)突變可能導(dǎo)致SHP2酶活性改變及與其它功能分子間的銜接異常,進(jìn)而參與調(diào)控細(xì)胞癌變及癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移。
　　 本課題旨在研究SHP2在調(diào)控乳腺癌的生物學(xué)功能及結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)并對分子機(jī)制進(jìn)行初步探討。
　　 方法:①Western Blotting檢測臨床實(shí)體瘤樣本(包括乳腺癌,肺癌,鼻咽癌,胃癌,膠質(zhì)瘤,結(jié)直腸癌)及乳腺癌細(xì)胞系中SH

3、P2蛋白的表達(dá)情況。②構(gòu)建hSHP2-shRNA質(zhì)粒,外源性轉(zhuǎn)入乳腺癌細(xì)胞,利用xCELLigence微電子傳感器系統(tǒng)、MTT等方法檢測SHP2表達(dá)沉默對細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。同時(shí)利用SHP2抑制劑處理并觀察PTP酶活性缺失對細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。③體外構(gòu)建常見群體疾病相關(guān)的PTPN11基因定點(diǎn)突變質(zhì)粒,外源性轉(zhuǎn)入乳腺癌細(xì)胞,探討其影響細(xì)胞生物學(xué)功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。④初步探討SHP2(PTPN11)重要結(jié)構(gòu)突變體的分子調(diào)控機(jī)制,特別是對ER

4、K/MAPK信號傳導(dǎo)通路的影響。
　　 結(jié)果:①在檢測過的實(shí)體瘤樣本中SHP2在癌組織中均呈現(xiàn)不同程度的高表達(dá),且在乳腺癌及乳腺癌細(xì)胞系中顯著上調(diào)。②SHP2表達(dá)沉默后乳腺癌細(xì)胞系粘附明顯增強(qiáng),而增殖能力及EGF介導(dǎo)的細(xì)胞骨架重排顯著下降,經(jīng)SHP2磷酸酶抑制劑處理后EGF介導(dǎo)的乳腺癌細(xì)胞骨架重排能力下降,而粘附能力沒有明顯影響。③成功構(gòu)建30多種常見群體疾病相關(guān)的PTPN11基因定點(diǎn)突變質(zhì)粒;經(jīng)xCELLigence高通量微電