環(huán)巴胺阻斷Hedgehog通路對食管癌細胞的影響及分子機制研究.pdf

1、目的:
　　通過Hedgehog(Hh)信號途徑的特異性抑制劑環(huán)巴胺(cyclopamine)在體外干預(yù)食管癌細胞,觀察環(huán)巴胺在體外對食管癌細胞生長的影響,并探討其可能的分子機制,以期為環(huán)巴胺應(yīng)用于食管癌的治療提供實驗室數(shù)據(jù)。
　　方法:
　　體外培養(yǎng)人食管癌EC9706細胞株,用不同濃度環(huán)巴胺處理,通過MTT檢測細胞凋亡率,了解環(huán)巴胺在體外對食管癌細胞的促凋亡作用;通過AO/EB雙熒光染色在細胞形態(tài)學方面觀察環(huán)巴胺對

2、食管癌細胞的影響;通過流式細胞術(shù)檢測環(huán)巴胺對食管癌細胞凋亡的影響;通過Western blot檢測環(huán)巴胺對食管癌細胞中Gli-1蛋白表達的影響。
　　結(jié)果:
　　1)MTT法實驗結(jié)果檢測不同濃度的環(huán)巴胺作用不同時間對EC9706細胞生長的影響,結(jié)果顯示DMSO組對EC9706細胞無明顯增殖抑制作用,與空白對照組相比差異無統(tǒng)計學意義(p>0.05)。環(huán)巴胺組(濃度分別為2.5、5、10、20μmol/L)對EC9706細胞生長

3、均有顯著抑制作用,抑制作用隨濃度增大而增大,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義。
　　2)AO/EB雙熒光染色結(jié)果熒光顯微鏡下可見環(huán)巴胺組有特征明顯的早期凋亡細胞,并且凋亡細胞隨藥物濃度的增加而增多,見圖1?？梢娂毎w積縮小,細胞變圓,邊緣毛糙,形成不規(guī)則突起,細胞核集,固縮。
　　3)EC9706細胞的凋亡情況使用Annexin FITC/PI雙染法后經(jīng)流式細胞儀測定了不同濃度環(huán)巴胺作用EC9706細胞24h后細胞的凋亡率分別為

4、(7.73±1.25)％、(13.37±1.42)%、(22.3±1.92)%、(33.57±1.75)%,DMSO組細胞的凋亡率為(2.14±0.16)%,不加藥對照組細胞的凋亡率(2.23±0.22)%,環(huán)巴胺對EC9706細胞有誘導(dǎo)其凋亡作用,不同濃度環(huán)巴胺組與對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(p<0.05),且細胞凋亡率隨環(huán)巴胺濃度增大而增加。見圖2。
　　4)Western blot結(jié)果不同濃度環(huán)巴胺處理細胞24h后,隨著藥

5、物濃度逐漸增加,Gli-1蛋白表達逐漸減少,而內(nèi)參β-actin蛋白表達無明顯變化。經(jīng)圖像處理系統(tǒng)分析,β-actin灰度值為參照,得出DMSO組和空白對照組無顯著差異(p>0.05),但環(huán)巴胺組與空白對照組相比有統(tǒng)計學差異(p<0.01),并且具有濃度依賴性。見圖3。
　　結(jié)論:
　　1)Hedgehog信號通路在食管癌EC9706細胞中是被激活的。
　　2)環(huán)巴胺對人食管癌細胞株EC9706有生長抑制作用,隨著藥物