丹參酮ⅡA抑制人食管癌細(xì)胞生長及機(jī)制研究.pdf

1、目的：食管癌在全世界的癌癥發(fā)病率占第7位，也是我國四種主要惡性腫瘤之一，1990-1992年全國調(diào)查資料顯示其死亡率為17.38/10萬，位居胃癌、肺癌和肝癌之后，中國河北省南部地區(qū)則是全世界食管癌致死率最高的地區(qū)之一，每年的致死率超過100/10萬，目前，治療食管癌的方法有手術(shù)治療、放療及化療，本研究以食管癌細(xì)胞株Eca-109進(jìn)行體外實驗，測定丹參酮Ⅱ A對食管癌細(xì)胞的生長抑制率；并揭示丹參酮Ⅱ A對于食管癌細(xì)胞抑制作用發(fā)生與bcl

2、-2和bax之間的關(guān)系，初步研究丹參酮Ⅱ A對人食管癌Eca-109細(xì)胞生長抑制作用及其作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.選取食管癌Eca-109細(xì)胞株作為研究對象，并隨機(jī)分為實驗組和對照組，采用MTT法檢測不同濃度的丹參酮Ⅱ A對人食管癌細(xì)胞株Eca-109增殖的影響。
　　 2.采用RT-PCR技術(shù)檢測作用72h后丹參酮ⅡA（TanⅡA）對于食管癌Eca-109細(xì)胞株的凋亡相關(guān)基因bcl-2和bax mRN

3、A表達(dá)的影響。
　　 3.采用Western-bloting方法檢測作用72h后丹參酮Ⅱ A（TanⅡ A）對于食管癌Eca-109細(xì)胞株的凋亡相關(guān)基因。bcl-2和bax蛋白表達(dá)的影響。
　　 4.實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析?；虮磉_(dá)校正數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用多因素方差分析及單因素方差分析，P<0.05為差異有顯著性。
　　 結(jié)果：
　　 1.MTT比色法顯示：TanⅡ

4、 A對Eca-109細(xì)胞增殖具有抑制作用。不同濃度TanⅡ A處理細(xì)胞后，與對照組相比，0.5μg/ml TanⅡ A處理組作用24h及48h后OD值未有明顯變化，表明對Eca-109細(xì)胞的生長抑制作用不明顯；0.5μ g/ml以上各處理組OD值均有顯著下降，差異具有顯著性，表明TanⅡ A對細(xì)胞的生長具有明顯抑制作用。且隨著TanⅡ A處理濃度的增大、作用時間的延長，OD值顯著下降，即TanⅡ A對Eca-109細(xì)胞的增殖抑制作用呈明

5、顯的時間-劑量依賴效應(yīng)。
　　 2.PCR結(jié)果顯示：不同濃度的TanⅡ A（1～4μ g/ml）處理Eca-109細(xì)胞72h后，與對照組相比，各實驗組bcl-2mRNA表達(dá)均有下降，而bax-mRNA表達(dá)均有上調(diào)，差異具有顯著性。隨TanⅡ A濃度的增大，Eca-109細(xì)胞bcl-2 mRNA表達(dá)下降和bax mRNA表達(dá)上調(diào)，呈濃度依賴性。
　　 3.Western結(jié)果顯示：不同濃度TanⅡ A（1～4μ g/ml）處

6、理細(xì)胞72h后，與對照組相比，各實驗組bcl-2的蛋白表達(dá)下降，bax的蛋白表達(dá)增加，差異具有顯著性。隨TanⅡA濃度的增大，Eca-109細(xì)胞bcl-2蛋白表達(dá)顯著下降，bax的蛋白顯著增加，均呈濃度依賴性。
　　 結(jié)論：
　　 1.通過MTT法證實了TanⅡA具有對Eca-109食管癌細(xì)胞株增殖抑制作用，呈明顯的時間-劑量依賴效應(yīng)，為食管癌的綜合治療提供了新的選擇。
　　 2.TanⅡ A抑制Eca-109食