p53基因表達(dá)下調(diào)調(diào)控涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞SACC-83發(fā)生上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化.pdf

1、腺樣囊性癌（ACC）是一種臨床常見(jiàn)的口腔頜面部惡性腫瘤，發(fā)病率占所有唾液腺腫瘤的10％左右，占所有唾液腺惡性腫瘤22％，占所有的頭部和頸部惡性腫瘤約1％。小唾液腺及口腔是最常見(jiàn)的發(fā)病位點(diǎn)。ACC具有嗜神經(jīng)侵襲（PNI）的特性，該特性是臨床診斷和治療ACC的一個(gè)難點(diǎn)。上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）是指細(xì)胞由上皮形態(tài)轉(zhuǎn)化為間質(zhì)形態(tài)，是一個(gè)快速且通?？赡娴募?xì)胞表型的改變，目前已被廣泛引入腫瘤的發(fā)生發(fā)展研究中來(lái)。p53基因是一個(gè)公認(rèn)的抑癌基因，國(guó)際癌癥

2、研究機(jī)構(gòu)（IARC）p53數(shù)據(jù)庫(kù)中含有超過(guò)26,000個(gè)體細(xì)胞突變型p53基因。不同腫瘤中p53基因突變的發(fā)生率不同，造血系統(tǒng)惡性腫瘤p53突變率約為10％，而卵巢癌、大腸癌、頭頸部惡性腫瘤的突變率為50-70％。在本課題組前期的研究中發(fā)現(xiàn)，涎腺腺樣囊性癌嗜神經(jīng)侵襲基因表達(dá)譜中p53基因存在表達(dá)下調(diào)的情況，另有文獻(xiàn)報(bào)道53基因可以調(diào)控乳腺癌細(xì)胞的EMT過(guò)程。因而揭示p53、EMT、涎腺腺樣囊性癌PNI之間的相互關(guān)系在ACC的PNI研究和

3、臨床治療中就產(chǎn)生了重要意義。
　　目的：
　　1．通過(guò)RNA干擾實(shí)驗(yàn)探明P53基因是否可以調(diào)控ACC發(fā)生EMT。
　　2．通過(guò)實(shí)驗(yàn)探索p53基因與涎腺腺樣囊性癌PNI之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1．通過(guò)Real time-PCR、Western blot技術(shù)篩選出p53基因RNA干擾的最佳干擾片段。
　　2．通過(guò)RNA干擾技術(shù)降低涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系SACC-83細(xì)胞中p53基因的表達(dá)，并利用Wes

4、tern blot和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)EMT典型細(xì)胞表面標(biāo)志物的表達(dá)情況，從而明確p53基因是否可以調(diào)控涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系SACC-83細(xì)胞發(fā)生EMT。
　　3．使用MTT細(xì)胞活性檢測(cè)方法探明p53基因表達(dá)降低對(duì)S ACC-83細(xì)胞活力的影響
　　4．使用流式細(xì)胞術(shù)和Annexin V-FITC&PI凋亡檢測(cè)試劑盒探明p53基因表達(dá)降低對(duì)SACC-83細(xì)胞抗凋亡能力的影響。
　　5．通過(guò)Transwell小室細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)

5、和劃痕實(shí)驗(yàn)探明p53基因表達(dá)降低對(duì)SACC-83細(xì)胞體外嗜神經(jīng)遷移能力的影響。
　　6.通過(guò)改良Transwell小室細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)探明p53基因表達(dá)降低對(duì)SACC-83細(xì)胞體外嗜神經(jīng)侵襲能力的影響。
　　結(jié)果：
　　1.成功篩選出p53基因RNA干擾最佳片段p53-homo270。
　　2. RNA干擾降低p53基因表達(dá)可以誘導(dǎo)SACC-83發(fā)生EMT樣轉(zhuǎn)化。
　　3. EMT樣轉(zhuǎn)化后的SACC-83細(xì)胞具

6、有更強(qiáng)的細(xì)胞活力和抗凋亡性。
　　4. EMT樣轉(zhuǎn)化后的SACC-83細(xì)胞具有更強(qiáng)的體外嗜神經(jīng)遷移和侵襲能力。
　　結(jié)論：
　　1. p53基因可能通過(guò)表達(dá)降低誘導(dǎo)涎腺腺樣囊性癌細(xì)胞系 SACC-83發(fā)生上皮間質(zhì)樣轉(zhuǎn)化；
　　2. p53基因表達(dá)降低誘導(dǎo)產(chǎn)生的EMT樣SACC-83細(xì)胞表型具有高表達(dá)間質(zhì)細(xì)胞表型標(biāo)志物Vimentin、N-Cadherin和C-Cadherin，低表達(dá)上皮細(xì)胞標(biāo)志物E-cadher