乙醇對H4-ⅡE細(xì)胞ADH、ALDH變化及細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：觀察不同濃度乙醇對H4-ⅡE細(xì)胞增殖抑制、酶的變化、脂質(zhì)代謝及細(xì)胞凋亡的影響，探討乙醇所致肝損傷的機(jī)制。
　　方法：選用大鼠H4-ⅡE細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，采用CCK-8法在不同濃度乙醇干預(yù)12h、24h、48h后，測定其對H4-ⅡE細(xì)胞的增殖抑制作用，分設(shè)對照組和實驗組，并進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察；western bolt法檢測ADH、ALDH、AMPK、PPARα、caspase3、caspase8、caspase9、TNF-α在

2、各組細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)；ELISA法檢測各組中ADH、ALDH的溢出量；流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞凋亡率。
　　結(jié)果：
　　1.CCK-8法：乙醇對H4-ⅡE細(xì)胞的生長有抑制作用，且呈一定的劑量依賴性。
　　2.形態(tài)學(xué)：乙醇作用于H4-ⅡE細(xì)胞后呈現(xiàn)出典型的細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變。
　　3.western bolt法：①乙醇對大鼠H4-ⅡE細(xì)胞ADH、ALDH、AMPK、PPARα表達(dá)的影響：與對照組相比，0.05mol/L乙醇處

3、理12h后表達(dá)無顯著改變（P>0.05），余各乙醇組表達(dá)減少（P<0.05）；②乙醇對大鼠H4-ⅡE細(xì)胞caspase3、caspase8、caspase9、TNF-α表達(dá)的影響：與對照組相比，各濃度乙醇組表達(dá)增多（P<0.05）。
　　4.ELISA法：①乙醇干預(yù)12h、24h：與對照組相比，各濃度乙醇組ADH、ALDH溢出量增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),且隨著乙醇濃度增加，溢出量增多；②乙醇干預(yù)48h：與對照組相比，

4、各濃度乙醇組ADH、ALDH溢出量增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；1.6mol/L乙醇組與1.2mol/L乙醇組比較，ADH、ALDH溢出量減少(P<0.05)；③乙醇干預(yù)72h：與對照組相比，各濃度乙醇組ADH、ALDH溢出量增多，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；1.2、1.6mol/L乙醇組與1.0mol/L乙醇組比較，ADH溢出量減少(P<0.05)；1.2mol/L乙醇組與1.6mol/L乙醇組比較，ADH溢出量無顯著

5、性差異(P>0.05)；1.2mol/L乙醇組與1.0mol/L乙醇組比較，ALDH溢出量無顯著性差異(P>0.05)；1.6mol/L乙醇組與1.2mol/L乙醇組比較，ALDH溢出量減少(P<0.05)。其余各組間比較均有差別（P<0.05），且隨著乙醇濃度的增加，ADH及ALDH的溢出量增多（P<0.05）。
　　5.流式細(xì)胞術(shù)：乙醇組正常活細(xì)胞比例較對照組減少（P<0.05），早期凋亡、晚期凋亡及死亡細(xì)胞細(xì)胞比例增多（P<