作用于DNA損傷修復通路的藥物在乳腺癌治療中的臨床前及臨床研究.pdf

1、第一部分通過ATM通路增強PARP抑制劑在乳腺癌細胞中敏感性的研究
　　近年來的研究表明，PARP抑制劑在BRCA1/2突變的乳腺癌和卵巢癌中顯示出良好的療效。PARP抑制劑在BRCA1/2突變腫瘤中的高敏感性是由于“協(xié)同致死”效應。BRCA1/BRCA2是參與細胞DNA損傷后同源重組修復(HR)的關鍵分子，而PARP-1則是介導DNA單鏈損傷后堿基切除修復過程的重要分子。PARP-1功能缺失的細胞中單鏈損傷無法及時修復，從而在D

2、NA復制叉處累積成為雙鏈損傷，這種DNA雙鏈損傷在BRCA1/2功能缺失的細胞中無法得到有效修復，從而引起細胞死亡。53BP1缺失是BRCA1突變細胞對PARP抑制劑的耐藥的機制之一。53BP1缺失可逆轉(zhuǎn)BRCA1缺失細胞中的部分HR缺損。ATM也是DNA雙鏈損傷應答過程中的重要調(diào)節(jié)分子。細胞內(nèi)出現(xiàn)DNA損傷之后，ATM迅速自磷酸化（重要標志位其絲氨酸1981位點磷酸化），并磷酸化一系列下游底物，包括細胞周期檢測點激酶Chk2、DNA修

3、復相關分子BRCA1和轉(zhuǎn)錄因子p53等。ATM異常見于多種實體腫瘤和造血系統(tǒng)腫瘤。由于ATM與BRCA1一樣，也參與PARP抑制劑導致的DNA損傷的修復過程，且可能主要是通過同源重組的方式。我們的研究目的在于探索三陰性及非三陰性乳腺癌細胞系中PARP與ATM是否具有協(xié)同致死效應，以及53BP1對這種協(xié)同效應的影響。
　　本研究中使用PARP抑制劑Olaparib和ATM抑制劑Ku-55933處理三陰性及非三陰性乳腺癌細胞。結果表明

4、ATM抑制劑能夠增強PARP抑制劑在三陰性與非三陰性乳腺癌細胞中的細胞毒作用，表現(xiàn)在生長抑制、克隆形成能力的抑制和促進凋亡上;二者的協(xié)同作用在三陰性乳腺癌細胞系中似乎更加明顯。此外，Olaparib和Ku-55933還能聯(lián)合誘導γ-H2AX發(fā)生核聚集，提示聯(lián)合用藥增加了對DNA的損傷，特別是增加了雙鏈損傷。為了探究53BP1對于ATM和PARP協(xié)同作用的影響，我們利用慢病毒感染構建了穩(wěn)定敲降TP53BP1的細胞系MCF-7-sh53BP

5、1和CAL-51-sh53BP1。敲降53BP1后，Olaparib和Ku-55933以及二者聯(lián)合使用對細胞的增殖抑制作用及對細胞克隆形成的抑制作用均下降，提示53BP1表達降低能夠逆轉(zhuǎn)ATM抑制劑與PARP抑制劑聯(lián)合處理細胞的細胞毒作用。
　　以上實驗結果說明PARP抑制劑Olaparib和ATM抑制劑Ku-55933對三陰性乳腺癌和非三陰性乳腺癌細胞系具有一定的殺傷效果，并且二者聯(lián)合使用能夠?qū)θ橄侔┊a(chǎn)生協(xié)同致死效應，明顯地提高

6、殺傷細胞的作用。同時，我們還發(fā)現(xiàn)三陰乳腺癌細胞系對Olaparib和Ku-55933以及二者的聯(lián)合使用的反應更為敏感。此外，本研究首次發(fā)現(xiàn)了53BP1功能缺陷能夠?qū)е氯橄侔┘毎麑laparib和Ku-55933以及二者的聯(lián)合使用產(chǎn)生一定程度的耐藥現(xiàn)象。這些結果將為臨床治療乳腺癌提供一定的理論依據(jù)。
　　第二部分比較含鉑與不含鉑方案治療三陰乳腺癌首發(fā)肺轉(zhuǎn)移的臨床研究
　　背景及目的：三陰性乳腺癌(TNBC)約占全部乳腺癌的1

7、5％～20％，具有發(fā)病年齡早（＜40歲）、期別晚、在非洲裔女性中發(fā)生率高的特點。此外，TNBC還易發(fā)生早期轉(zhuǎn)移，其復發(fā)時間多在初診后1-3年內(nèi)，此后復發(fā)率急劇下降。TNBC侵襲性強，較其他類型乳腺癌更易侵犯肺、腦等內(nèi)臟器官，骨轉(zhuǎn)移的發(fā)生率則相對較低。回顧性研究表明TNBC首發(fā)轉(zhuǎn)移部位與預后具有相關性;首發(fā)轉(zhuǎn)移部位為肺轉(zhuǎn)移者預后最好，其次為骨，肝、腦轉(zhuǎn)移預后最差?；熓悄壳稗D(zhuǎn)移性TNBC主要的治療手段。我們的前期研究結果提示含鉑方案治療晚

8、期TNBC的療效可能優(yōu)于非鉑方案。然而，目前尚無研究探索TNBC肺轉(zhuǎn)移的優(yōu)效化療方案。本研究擬比較含鉑與非鉑方案一線治療TNBC肺轉(zhuǎn)移的療效。
　　方法：符合入選標準的TNBC患者共65例，按照一線化療方案是否含鉑類藥物（順鉑或卡鉑），將其分為含鉑組與不含鉑組。含鉑組一線化療方案包括順鉑或卡鉑聯(lián)合紫杉類、吉西他濱、長春瑞濱等。非含鉑組化療方案包括表阿霉素聯(lián)合紫杉醇或多西他賽、多西他賽或長春瑞濱聯(lián)合卡培他濱等。含鉑聯(lián)合方案中鉑類給藥

9、方式均為:順鉑75mg/m2，第1天（或分2～3天），每21為一周期;卡鉑AUC=5，第1天，每21/28天為一周期。所有患者均在化療前及化療中每2周期進行影像學檢查，以評價療效?；煹目陀^療效(objective response，OR)評價根據(jù)實體瘤評價標準1.1版(RECIST1.1)。至少完成2周期化療者可評價臨床療效?；煼桨腐熜У挠^察指標包括總生存時間(overall survival，OS)、無進展生存時間(progres

10、sion freesurvival，PFS)和客觀緩解率(objective response rate，ORR)。療效觀察指標包括無進展生存期(PFS)、總生存期(OS)和客觀緩解(OR)。
　　結果：兩組基線大致平衡。含鉑組中(n=32)，2例(6.3％)獲完全緩解(CR)，16例(50.0％)獲部分緩解(PR)，11例(34.4％)疾病穩(wěn)定(SD)，而其余3例(9.4％)則疾病進展(PD)。非含鉑組患者中(n=33)，2例(

11、6.1％)獲CR，6例(18.2％)獲PR，16例(48.5％) SD，9例(27.3％) PD。含鉑組患者中位PFS為10.0個月，顯著優(yōu)于接受非含鉑組患者（中位PFS6.0個月，P=0.012）;含鉑組患者OS也較非含鉑組顯著延長（32月vs22月，P=0.006）。在對包括局部淋巴結轉(zhuǎn)移、肺轉(zhuǎn)移相關癥狀、一線含鉑方案化療、DFI、肺轉(zhuǎn)移灶數(shù)量和大小的COX多因素分析中，僅一線含鉑方案化療與OS顯著相關，為TNBC首發(fā)肺轉(zhuǎn)移的獨立預