關(guān)于SLC5A8基因和p53基因在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的臨床研究.pdf

1、背景：結(jié)直腸癌是人類消化道最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，它的發(fā)病率居于世界第3位，僅次于肺癌和胃癌。目前在全球范圍內(nèi)，結(jié)直腸癌每年新增人數(shù)約100萬(wàn)，死亡人數(shù)約50萬(wàn)，約占所有癌癥新發(fā)病例的10％-15%。其早期癥狀不典型，約50%的患者在就診時(shí)已經(jīng)是晚期或已發(fā)生了轉(zhuǎn)移。由于環(huán)境污染、遺傳表達(dá)以及不良的生活習(xí)慣等多種因素的影響，結(jié)直腸癌的發(fā)病率越來(lái)越高?，F(xiàn)在人們認(rèn)為結(jié)直腸癌的發(fā)生是由多基因、多步驟參與的復(fù)雜過(guò)程，涉及到某些癌基因的激活和抑癌基因

2、的失活。在正常情況下，結(jié)直腸粘膜上皮細(xì)胞的增殖和凋亡之間保持著動(dòng)態(tài)平衡，一旦打破該平衡，就會(huì)發(fā)生一系列的病理改變。目前結(jié)直腸癌的診斷主要依靠?jī)?nèi)鏡、病理、鋇劑灌腸檢查、超聲、CT、血清腫瘤標(biāo)志物等方法。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，人們對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)病的機(jī)理有了更深入的了解，很多研究者檢測(cè)到結(jié)直腸癌組織中某些抑癌基因表達(dá)水平發(fā)生了變化，提示其與結(jié)直腸癌的發(fā)生存在一定關(guān)系。溶質(zhì)載體家族5成員8（solute carrier family5 membe

3、r8，SLC5A8）是近年發(fā)現(xiàn)的一個(gè)新的候選抑癌基因，P53基因是目前研究的比較深入和廣泛的抑癌基因，它們與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展都存在一定關(guān)系。
　　SLC5A8基因是2002年Rodriguez等發(fā)現(xiàn)，并且從人腎cDNA文庫(kù)中克隆鑒定的編碼610個(gè)氨基酸蛋白的序列，認(rèn)為是SLC5家族的第8個(gè)成員，被命名為SLC5A8。SLC5A8基因位于人類染色體的12q13-23，編碼蛋白屬于鈉離子/葡萄糖共轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員，是鈉離子耦聯(lián)的轉(zhuǎn)

4、運(yùn)短鏈脂肪酸、乳酸、煙酸和碘化物的載體。SLC5A8編碼蛋白在腸道中分布于末端回腸和整段大腸的刷狀緣膜，并在末端結(jié)腸和直腸高表達(dá)。SLC5A8基因在人類的許多腫瘤中如甲狀腺癌、食管癌、胃癌、肺癌、腦膠質(zhì)瘤等中表達(dá)降低或缺失，目前，國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究認(rèn)為SLC5A8基因表達(dá)下降的機(jī)制主要是SLC5A8基因外顯子1的GPG島的甲基化及組蛋白去乙?；?。SLC5A8表達(dá)的轉(zhuǎn)運(yùn)體的所有底物中，丁酸、丙酸和丙酮酸的功能是作為組蛋白脫乙?；敢种苿?，它們

5、可以介導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞的凋亡，可能是其抑制腫瘤的機(jī)制。尤其是丁酸，它是細(xì)菌的發(fā)酵產(chǎn)物，它可以促進(jìn)正常結(jié)腸上皮細(xì)胞的變異，通過(guò)上調(diào)促凋亡基因和下調(diào)抗增殖基因而導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。所以SLC5A8基因的失活可能成為結(jié)直腸癌發(fā)生的原因之一。
　　p53基因在1979年由Lane等首次報(bào)道，是目前研究的比較深入的基因之一，它位于人類17號(hào)染色體的短臂，包含有11個(gè)外顯子和10個(gè)內(nèi)含子，編碼一個(gè)包含393個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)。對(duì)它的認(rèn)識(shí)人們經(jīng)歷了腫瘤抗

6、原、癌基因、抑癌基因三個(gè)階段。p53基因有野生型和突變型兩種，野生型p53是抑癌基因，它參與細(xì)胞周期的調(diào)控，對(duì)抑制腫瘤的增殖有重要作用，當(dāng)野生型p53轉(zhuǎn)變?yōu)橥蛔冃蚿53后，則失去了對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，進(jìn)而導(dǎo)致了腫瘤的發(fā)生。目前研究發(fā)現(xiàn)p53基因與大約50%的腫瘤有密切關(guān)系，幾乎所有的腫瘤都有p53基因的突變。
　　目的：探討SLC5A8基因和p53基因在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)。
　　方法：采用（1）實(shí)時(shí)熒光定量PCR（RT-

7、qPCR）檢測(cè)SLC5A8基因mRNA和p53基因mRNA在30例結(jié)直腸癌患者的癌組織和癌旁組織中的水平；（2）HE染色檢測(cè)收集的結(jié)直腸癌患者的癌組織和癌旁組織的腺管及細(xì)胞的形態(tài)；（3）免疫組化檢測(cè)SLC5A8基因蛋白和p53基因蛋白在結(jié)直腸癌患者的癌組織和癌旁組織的表達(dá)情況。應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，符合正態(tài)分布的計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ x±s）表示，不符合正態(tài)分布的以平均秩次表示，SLC5A8基因mRNA水平兩組間和p

8、53基因mRNA水平兩組間的比較符合正態(tài)分布的采用t檢驗(yàn)，不符合正態(tài)分布的兩組間比較采用Mann-Whitney u秩和檢驗(yàn)，多組間采用K-ruskal-walls H秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)到（1）30例結(jié)直腸癌患者中22例患者癌組織中SLC5A8基因mRNA水平低于癌旁組織；3例患者癌組織和癌旁組織重SLC5A8基因均不表達(dá)；5例患者癌組織中SLC5A8基因mRNA水平高于

9、癌旁組織。SLC5A8基因mRNA水平在癌組織和癌旁組織的差異與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。（2）30例結(jié)直腸癌患者中13例患者癌組織中p53基因mRNA水平低于癌旁組織；17例患者癌組織中p53基因mRNA水平高于癌旁組織，p53基因mRNA水平在癌組織和癌旁組織的差異與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤分期沒(méi)有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05），與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）

10、。免疫組化技術(shù)檢測(cè)到（1）SLC5A8基因蛋白表達(dá)主要位于結(jié)直腸組織細(xì)胞的胞質(zhì)，癌旁組織細(xì)胞的胞質(zhì)有少量表達(dá)，而癌組織細(xì)胞的胞質(zhì)未見(jiàn)明確表達(dá)。（2）p53基因蛋白表達(dá)主要位于結(jié)直腸組織細(xì)胞的胞核，在癌組織細(xì)胞的胞核有一定的表達(dá)，而癌旁組織細(xì)胞的胞核幾乎未見(jiàn)表達(dá)。
　　結(jié)論：（1）SLC5A8基因在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)明顯下降，提示其表達(dá)水平與結(jié)直腸癌的發(fā)生可能存在一定關(guān)系；
　?。?）p53基因在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)升高，提示其