禁食-恢復(fù)投喂條件下鰱神經(jīng)肽Y及三個(gè)瘦素相關(guān)基因的表達(dá)分析.pdf

1、攝食和能量代謝對魚類的生長至關(guān)重要，不適當(dāng)?shù)臄z食和能量代謝會(huì)抑制動(dòng)物生長、延緩青春期、降低動(dòng)物免疫力，甚至引起動(dòng)物死亡。而在自然界中，由于各種因素的影響，常常導(dǎo)致魚類在其生活周期面臨食物資源的缺乏而受到饑餓脅迫。瘦素(leptin，LEP)和神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y，NPY)是動(dòng)物食欲調(diào)節(jié)系統(tǒng)中兩個(gè)主要的因子，二者相互作用調(diào)節(jié)動(dòng)物的攝食和能量代謝。
　　鰱（Hypophthalmichthys molitrix）隸屬

2、于鯉形目（Cypriniformes）、鯉科(Cyprinidae)、鰱屬（Hypophthalmichthys），是我國傳統(tǒng)養(yǎng)殖的“四大家魚”之一，在我國分布廣泛，年產(chǎn)量高，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。本文以鰱為研究對象，開展了其神經(jīng)肽Y(neuropeptide Y，NPY)基因及三個(gè)瘦素相關(guān)基因(leptin，LEP; leptinreceptor, LEPR; leptin receptor overlapping transcript

3、，LEPROT)的克隆，組織表達(dá)檢測以及在禁食—恢復(fù)投喂條件下這四個(gè)基因在鰱腦和肝臟中的表達(dá)特征分析，從分子水平初步探討NPY和LEP對鰱攝食和能量代謝的調(diào)節(jié)作用。本研究的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1.鰱神經(jīng)肽Y(NPY)基因的克隆及其在禁食—恢復(fù)投喂條件下的表達(dá)特征分析鰱NPY基因cDNA序列全長782 bp，包括5'端非翻譯區(qū)68 bp，3'端非翻譯區(qū)423 bp，開放閱讀框291 bp，編碼96個(gè)氨基酸;氨基酸相似性比較和系統(tǒng)

4、進(jìn)化分析結(jié)果顯示NPY較為保守;NPY在所檢測的13個(gè)組織中均有表達(dá)，并且在腦垂體中表達(dá)量最大;禁食導(dǎo)致NPY mRNA在腦中的表達(dá)量顯著上升，恢復(fù)投喂6h后下降到正常水平，表明NPY對鰱攝食有促進(jìn)作用;在肝臟中，禁食前5d NPY mRNA表達(dá)量顯著上升，禁食第7d急劇下降，恢復(fù)投喂4h后下降到正常水平，NPY mRNA在腦和肝臟中表達(dá)的組織差異性表明NPY在外周組織中發(fā)揮著與在神經(jīng)系統(tǒng)中不同的作用，但在外周組織中的具體作用機(jī)制有待進(jìn)

5、一步研究。
　　2.鰱瘦素相關(guān)三個(gè)基因的克隆及其在禁食—恢復(fù)投喂條件下的表達(dá)特征分析鰱LEPR基因cDNA序列全長為3662 bp，包含3240 bp的開放閱讀框，編碼1079個(gè)氨基酸殘基;LEPROT基因cDNA序列全長718 bp，開放閱讀框393 bp，編碼130個(gè)氨基酸殘基;氨基酸序列相似性比較表明LEP和LEPR基因在分子進(jìn)化過程中不保守，與人LEP和LEPR的氨基酸序列同源一致性僅為20.2％和25.9％，LEPROT

6、基因相對較保守;進(jìn)化樹分析顯示硬骨魚類LEP、LEPR和LEPROT基因均從四足類分化而來;LEP主要在肝臟中表達(dá)，LEPR和LEPROT在所檢測的13種組織中幾乎都表達(dá)，但在腦垂體中表達(dá)量最大;在腦中，禁食期間，LEP、LEPR和LEPROTmRNA的表達(dá)顯著上升，恢復(fù)投喂之后急劇下降到基礎(chǔ)水平;肝臟中，3個(gè)基因mRNA的表達(dá)各異，但各基因的整體表達(dá)趨勢均在禁食—恢復(fù)投喂期間有一段下降的過程。
　　本研究所檢測到的鰱中LEP、L