TGFBI蛋白與多倍體腫瘤及腫瘤耐藥的相關(guān)性研究.pdf

1、目的:
　　當(dāng)今惡性腫瘤發(fā)展迅速，已成為人類健康的嚴(yán)重威脅。惡性腫瘤的治療主要包括手術(shù)治療、化療及放療，大概有近60％的病人接受化療。紫杉醇作為卵巢癌化療的一線藥物，其有效率可達(dá)70％-80％，但是卵巢癌的5年生存率仍徘徊在30％-40％，主要原因是治療過(guò)程中腫瘤出現(xiàn)耐藥，導(dǎo)致化療失敗。據(jù)統(tǒng)計(jì)，90％以上腫瘤患者的死亡在不同程度上是受腫瘤耐藥的影響。
　　轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)的基因(transforming growth fac

2、tor-β induced gene，TGFBI)蛋白屬于細(xì)胞外基質(zhì)分子之一，最初被關(guān)注的是其調(diào)節(jié)細(xì)胞粘附和遷移的能力。在不同的腫瘤中，TGFBI蛋白的表達(dá)也不相同，如在結(jié)腸癌、食管癌、腎癌其表達(dá)升高，而在非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌中表達(dá)將低。有研究顯示，TGFBI基因的甲基化與紫杉醇耐藥有關(guān)。TGFBI表達(dá)的缺失可增加非小細(xì)胞肺癌對(duì)凋亡的抗性，且增加TGFBI的表達(dá)可以提高其對(duì)多種化療藥物的敏感性。說(shuō)明TGFBI蛋白與腫瘤耐藥性有關(guān)。

3、>　　許多研究提示多倍體細(xì)胞可以引起腫瘤耐藥。我們的前期研究在紡錘絲毒性藥物的誘導(dǎo)下可形成穩(wěn)定生長(zhǎng)的多倍體腫瘤細(xì)胞MDA-MB-231-T，且該細(xì)胞除了對(duì)VP16更敏感外，對(duì)紫杉醇類、表阿霉素、奧沙利銷、長(zhǎng)春新堿及氟尿嘧啶等多種化療藥物都表現(xiàn)為耐藥，且與原腫瘤細(xì)胞相比具有顯著性差異。這種多倍體細(xì)胞與原代細(xì)胞相比，低表達(dá)TGFBI蛋白。而將TGFBI基因轉(zhuǎn)染MDA-MB-231-T，發(fā)現(xiàn)可以增加其對(duì)紫杉醇的敏感性。那么多倍體腫瘤細(xì)胞的發(fā)生

4、、腫瘤細(xì)胞的耐藥與TGFBI蛋白的表達(dá)三者之間是否有密切聯(lián)系呢？現(xiàn)國(guó)內(nèi)外未見(jiàn)報(bào)道。
　　本實(shí)驗(yàn)以乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞為研究對(duì)象，利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)使其瞬時(shí)過(guò)表達(dá)TGFBI蛋白，運(yùn)用MTT法檢測(cè)兩組細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率，運(yùn)用流式細(xì)胞儀比較兩組細(xì)胞的細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡以及細(xì)胞的倍體變化，初步探討TGFBI蛋白與多倍體腫瘤及腫瘤耐藥之間的關(guān)系。
　　方法:
　　1.將載有TGFBI基因的質(zhì)粒及空質(zhì)粒分別瞬時(shí)轉(zhuǎn)染MDA

5、-MB-231細(xì)胞，并分為實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組。
　　2.利用western blot技術(shù)檢測(cè)兩組細(xì)胞中TGFBI蛋白的表達(dá)，驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果。
　　3.MTT法比較兩組細(xì)胞的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率。
　　4.利用流式細(xì)胞儀通過(guò)PI染色比較兩組細(xì)胞的細(xì)胞周期及細(xì)胞染色體倍體變化。
　　5.利用流式細(xì)胞儀通過(guò)Annexin V-FITC/PI法比較兩組細(xì)胞的細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　1.western blot檢測(cè)

6、結(jié)果顯示:TGFBI蛋白在實(shí)驗(yàn)組高表達(dá)，說(shuō)明TGFBI基因已成功轉(zhuǎn)染MDA-MB-231細(xì)胞。
　　2.MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:以不同濃度的紫杉醇處理過(guò)表達(dá)TGFBI蛋白的MDA-MB-231細(xì)胞及轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對(duì)照組細(xì)胞72小時(shí)后，相對(duì)于轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對(duì)照組細(xì)胞，過(guò)表達(dá)TGFBI的細(xì)胞表現(xiàn)出更高的生長(zhǎng)抑制率。
　　3.細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:紫杉醇處理過(guò)表達(dá)TGFBI蛋白的MDA-MB-231細(xì)胞較轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒的對(duì)照組細(xì)胞表現(xiàn)出更高的