紡錘絲毒性藥物誘導(dǎo)的多倍體腫瘤對(duì)化療藥物敏感性的研究.pdf

1、目的：
　　腫瘤嚴(yán)重威脅人類健康，化療是實(shí)體腫瘤綜合治療的重要組成部分，紫杉醇、長(zhǎng)春新堿等“紡錘絲毒性藥物”是很多腫瘤化療的一線用藥，在臨床取得了很好的療效，其殺滅腫瘤的重要機(jī)制之一為誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。然而在臨床工作中我們注意到，部分腫瘤對(duì)該類藥物非常敏感，腫瘤組織在經(jīng)歷數(shù)次化療后消失殆盡，然而更為常見(jiàn)的現(xiàn)象則是：腫瘤組織在開(kāi)始化療的初期對(duì)該類藥物敏感，不久出現(xiàn)耐藥，或腫瘤組織根本對(duì)該類藥物無(wú)明顯反應(yīng)，后兩種現(xiàn)象是導(dǎo)致腫瘤失控和復(fù)

2、發(fā)的根本原因。據(jù)統(tǒng)計(jì)90％以上腫瘤患者的死亡在不同程度上與耐藥有關(guān)。
　　我們的前期研究發(fā)現(xiàn)，紡錘絲毒性藥物對(duì)一部分細(xì)胞起到誘導(dǎo)凋亡的作用，然而有些細(xì)胞在接觸這類藥物時(shí)，并非出現(xiàn)凋亡，而是以形成多倍體為結(jié)局。國(guó)外學(xué)者的研究也發(fā)現(xiàn)：多倍體腫瘤對(duì)常用的放、化療極不敏感，具有多倍體亞克隆的腫瘤預(yù)后更差。因此，我們推測(cè)多倍體的形成可能與腫瘤發(fā)生耐藥有關(guān)。多年來(lái)，科學(xué)家們一直致力于對(duì)腫瘤耐藥機(jī)制的探討，并提出了很多學(xué)說(shuō)及可能的機(jī)制，，然而至

3、今仍沒(méi)有找到哪種方法可以從根本上解決這一臨床難題。隨著科學(xué)的不斷發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到腫瘤耐藥的發(fā)生原因是多方面的，除了目前多藥耐藥基因與耐藥相關(guān)以外，我們推測(cè)多倍體的形成很可能是導(dǎo)致紡錘絲毒性藥物使用后腫瘤出現(xiàn)耐藥的一個(gè)重要原因，然而對(duì)于這一可能的耐藥新機(jī)制尚無(wú)人提出。本研究從紡錘絲毒性藥物誘導(dǎo)腫瘤形成多倍體這一現(xiàn)象為切入點(diǎn)，通過(guò)比較多倍體腫瘤與原腫瘤(紡錘絲毒性藥物應(yīng)用前)對(duì)各種常用化療藥物的IC50，探討多倍體形成與腫瘤耐藥之間的關(guān)

4、系，并通過(guò)深入剖析多倍體的發(fā)生的分子機(jī)制，試圖找尋解決此種耐藥可能的干預(yù)點(diǎn)/方法，提出以抑制多倍體亞克隆的形成為基礎(chǔ)的新的預(yù)防腫瘤耐藥發(fā)生的策略。
　　方法：
　　以100ng/ml紡錘絲毒性藥物諾考達(dá)唑處理人乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞，流式細(xì)胞儀分選獲得多倍體腫瘤細(xì)胞T-MDA-MB-231，觀察T-MDA-MB-231細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化和增殖分裂情況。采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)比較紫杉醇、多西他賽、長(zhǎng)春新堿、表

5、阿霉素、氟尿嘧啶、依托泊甙和草酸鉑對(duì)T-MDA-MB-231和MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制作用，并計(jì)算出不同藥物的半數(shù)抑制濃度(IC50)。采用AnnexinV-FITC/PI法檢測(cè)紫杉醇和多西他賽對(duì)MDA-MB-231和T-MDA-MB-231細(xì)胞凋亡的影響。以siRNA技術(shù)下調(diào)T-MDA-MB-231細(xì)胞中Bcl-2mRNA的表達(dá)，采用MTT法檢測(cè)siRNA干擾后不同化療藥物對(duì)T-MDA-MB-231細(xì)胞的增殖抑制作用，評(píng)價(jià)該

6、基因在多倍體耐藥中的作用。
　　結(jié)果：
　　1、紡錘絲毒性藥物誘導(dǎo)形成的多倍體腫瘤(T-MDA-MB-231)具有克隆能力，長(zhǎng)期培養(yǎng)能穩(wěn)定生長(zhǎng)并保持多倍體的倍性，較MDA-MB-231細(xì)胞體積增大，其增殖分裂速度明顯低于MDA-MB-231細(xì)胞(P<0.05)。
　　2、紫杉醇、多西他賽、長(zhǎng)春新堿、草酸鉑、氟尿嘧啶和表阿霉素對(duì)T-MDA-MB-231細(xì)胞的IC50分別為(6.37±0.07)μmol/L、(32.98±

7、1.48)μmol/L、(35.28±1.66)μmol/L、(19.07±0.45)μmol/L、(85.49±3.21)μmol/L和(0.53±0.06)μmol/L，均明顯高于MDA-MB-231細(xì)胞(P<0.01)；依托泊甙對(duì)T-MDA-MB-231細(xì)胞的IC50為(2.85±0.50)μmol/L，明顯低于MDA-MB-231細(xì)胞(P<0.01)。
　　3、T-MDA-MB-231細(xì)胞高表達(dá)Bc1-2，應(yīng)用siRNA技

8、術(shù)下調(diào)該細(xì)胞中Bc1-2mRNA的表達(dá)后，多西他賽對(duì)T-MDA-MB-231細(xì)胞的IC50[(21.52±0.68)μmol/L]明顯降低(P<0.05)，對(duì)依托泊甙的IC50[(19.59±0.48)μmol/L]明顯增高(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、多倍體腫瘤模型的建立為深入研究多倍體腫瘤提供了良好的平臺(tái)。
　　2、紡錘絲毒性藥物誘導(dǎo)的多倍體腫瘤對(duì)多數(shù)抗癌藥物耐藥，而對(duì)VP16相對(duì)敏感，VP16可能成為治