xCT調(diào)節(jié)肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的作用機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:
　　肝癌是世界范圍內(nèi)最常見的10種惡性腫瘤之一，在我國(guó)肝癌是死亡率僅次于胰腺癌的第二大常見惡性腫瘤，肝癌初期癥狀不明顯，晚期主要表現(xiàn)為肝痛、腹水、乏力、消瘦等癥狀。由于肝癌早期不易發(fā)現(xiàn)，晚期患者癌細(xì)胞易擴(kuò)散，所以臨床上一般采用的放化療、外科手術(shù)與肝移植等手段治愈率較低，因此對(duì)于肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究顯得尤為重要，然而目前對(duì)于肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移的機(jī)制還不清楚。近期研究發(fā)現(xiàn)，很多腫瘤細(xì)胞中xCT的表達(dá)明顯升高，xCT是Xc-氨基

2、酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的功能性亞基，對(duì)于維持細(xì)胞內(nèi)GSH（谷胱甘肽）的含量和細(xì)胞的氧化還原狀態(tài)起著重要的作用。近年來，研究發(fā)現(xiàn)xCT與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系，但其與肝細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移的關(guān)系尚未報(bào)道，因此本研究主要探討人類肝細(xì)胞癌中xCT的表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移的影響及其機(jī)制。
　　研究方法:
　　用逆轉(zhuǎn)錄PCR檢測(cè)不同轉(zhuǎn)移能力的人乳腺癌、人肝癌和小鼠黑色素瘤細(xì)胞中xCT的表達(dá)水平，分析xCT的表達(dá)與三種癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系;用x

3、CT特異性抑制劑SASP處理高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞，Western Blot和RT-PCR方法檢測(cè)自噬標(biāo)志物以及EMT過程相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)水平，并用傷口愈合實(shí)驗(yàn)和Transwell檢測(cè)xCT的活性與肝癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力的關(guān)系;將xCT抑制劑SASP分別與自體吞噬（自噬）抑制劑3-MA和還原劑β-ME聯(lián)合用藥處理細(xì)胞，抑制自噬的發(fā)生，進(jìn)一步分析xCT的活性與自噬及EMT的關(guān)系。
　　結(jié)果:
　　第一部分:
　　1.人肝癌細(xì)胞與小鼠黑

4、色素瘤細(xì)胞中xCT的表達(dá)水平高于人正常肝細(xì)胞與小鼠黑色素細(xì)胞中xCT的表達(dá)水平。
　　2.人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞和小鼠高轉(zhuǎn)移黑色素瘤細(xì)胞中xCT的表達(dá)水平分別高于人低轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞和小鼠低轉(zhuǎn)移黑色素瘤細(xì)胞中xCT的表達(dá)水平。
　　3.抑制高轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞中xCT的活性后，癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力降低。
　　第二部分:
　　1.利用xCT的特異性抑制劑SASP處理人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞97H，可以降低細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。
　　

5、2.用SASP處理97H細(xì)胞使xCT活性降低，能夠誘導(dǎo)其發(fā)生自噬。
　　3.肝癌細(xì)胞97H的自噬過程伴隨Snail的降解，并抑制細(xì)胞發(fā)生EMT過程。
　　4.在肝癌細(xì)胞97H中，通過抑制自噬的發(fā)生，可以減少Snail的降解以及減弱對(duì)EMT過程的抑制。
　　結(jié)論:
　　1.xCT在人乳腺癌、人肝癌和小鼠黑色素瘤細(xì)胞中的表達(dá)上調(diào)，而且與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力呈正相關(guān)。
　　2.xCT通過調(diào)節(jié)人類高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞97H發(fā)