青蒿琥酯通過自噬途徑誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞G2-M期阻滯.pdf

1、目的:自噬(Autophagy)在腫瘤治療中發(fā)揮重要作用。有研究顯示青蒿琥酯(Artesunate,ART)對(duì)多種腫瘤細(xì)胞均有顯著抑制作用,并且能誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞發(fā)生自噬,然而其自噬依賴性抗腫瘤作用機(jī)制尚不完全清楚。本研究擬探討artesunate是否是通過誘導(dǎo)自噬途徑對(duì)乳腺癌細(xì)胞起抗腫瘤作用。
　　方法:1. Artesunate處理乳腺癌細(xì)胞后,檢測其增殖和克隆形成能力,細(xì)胞周期及自噬基因(Beclin1、LC3)的表達(dá)。2.自

2、噬基因Beclin1小干擾RNA(Small interfering RNA,siRNA)或自噬抑制劑(3-methyladenine,3-MA)阻斷自噬信號(hào)通路后,再用artesunate處理乳腺癌細(xì)胞,檢測增殖和克隆形成能力,細(xì)胞周期及自噬基因(Beclin1、LC3)的表達(dá)。3. Artesunate分別與表阿霉素(EPI)、多西他賽(DOC)聯(lián)合處理,檢測其增殖能力。4.分別用MTT、平板克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)、實(shí)時(shí)熒光定量P

3、CR、Western blot、細(xì)胞免疫熒光等方法檢測乳腺癌細(xì)胞的增殖能力、克隆形成能力、細(xì)胞周期及自噬基因(Beclin1、LC3)mRNA及蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:1. Artesunate抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231增殖,呈劑量和時(shí)間依賴效應(yīng)。2. Artesunate抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231克隆形成,呈劑量依賴效應(yīng)。3. Artesunate使乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-

4、231細(xì)胞周期阻滯于G2/M期,并且伴隨p21 mRNA表達(dá)上調(diào)。4. Artesunate上調(diào)乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231 Beclin1 mRNA及蛋白表達(dá)。5. Artesunate使LC3由Ⅰ型向Ⅱ轉(zhuǎn)換,誘導(dǎo)LC3蛋白在自噬體上聚集,促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞MCF-7自噬體形成。6.采用自噬抑制劑3-MA或者Beclin1-siRNA阻斷自噬通路,可削弱artesunate誘導(dǎo)的自噬體的形成、細(xì)胞生長抑制作用、G2/M期阻滯