骨髓間充質(zhì)干細胞對重度脂肪變供肝肝移植術后肝功能影響的實驗研究.pdf

1、本文從以下幾部分進行論述：
　　第一章:大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的分離、培養(yǎng)與鑒定
　　目的:體外培養(yǎng)活性好、純度高的骨髓間充質(zhì)干細胞。
　　方法:采用密度梯度離心法分離培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，采用流式細胞儀鑒定其表面抗原的表達情況，用成軟骨試劑、成脂試劑誘導BMSCs分化成軟骨細胞、脂肪細胞。
　　結果:獲得細胞具有明顯的貼壁性，其細胞表面高表達CD44、CD90、CD29抗原分子，低表達CD45、CD34、CD11

2、b抗原分子。成軟骨誘導分化3周，BMSCs即可分化成軟骨細胞，成脂誘導分化2周，即可分化成脂肪細胞。
　　結論:密度梯度離心法可以獲得活性好、純度高、具有多向分化潛能的BMSCs。
　　第二章:大鼠脂肪變供肝肝移植模型的建立
　　目的:建立脂肪變供肝肝移植模型。
　　方法:通過高脂飲食8周建立脂肪肝模型，采用在kamada肝移植模型的基礎上，改進手術方法，預實驗50對，正式實驗40對，觀察手術成功率，并分別于術前

3、1天、術后1天、術后3天、術后5天、術后7天、術后12天分別抽血，觀察谷草轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白等指標的變化規(guī)律。
　　結果:通過預實驗獲得較高的模型成功率，正式實驗40對大鼠肝移植手術成功率為90％，術后谷草轉(zhuǎn)氨酶、白蛋白短暫升高后逐漸恢復。
　　結論:成功建立了穩(wěn)定的大鼠脂肪變供肝肝移植模型。
　　第三章:骨髓間充質(zhì)干細胞在移植肝中的定居
　　目的:探討B(tài)MSCs在移植肝中的定居情況
　　方法:分別采用DAPI

4、、慢病毒行骨髓間充質(zhì)干細胞標記，選用標記速率快、效果好的標記物標記后，于肝移植過程中，門靜脈套管前行BMSCs輸注，分別于術后7d、12d，取病理切片熒光顯微鏡下觀察其定居情況
　　結果:濃度為1.5ul/L的DAPI與細胞共培養(yǎng)標記12h后，在熒光倒置顯微鏡下觀察其細胞藍光標記率達95％左右。含有綠色熒光蛋白基因的慢病毒與干細胞共培養(yǎng)12h后，BMSCs的熒光表達很低，繼續(xù)感染1天后其熒光標記率才達到40％左右。采用DAPI標記

5、BMSCs輸注移植肝后，7d、12d都可觀察到標記的BMSCs，但熒光強度逐漸減弱。
　　結論:BMSCs能夠成功定居在移植的肝臟中
　　第四章:骨髓間充質(zhì)干細胞對重度脂肪變供肝肝移植術后肝功能的影響
　　目的:探討B(tài)MSCs能否對重度脂肪變供肝肝移植術后肝功能起到保護作用
　　方法:實驗分干細胞組和對照組兩組，每組行肝移植30只，對照組于門靜脈套管前輸注平衡鹽溶液1ml，干細胞組于門靜脈套管前輸注BMSCs1m

6、l，分別于術后1d、3d、5d、7d處死5只，檢測肝功能AST、ALT、ALB、TB指標，每組剩余10只觀察術后的大鼠的生存情況。
　　結果:對照組組和干細胞組術后1d、3d、5d、7d的肝功能指標的比較如下:AST指標分別為1040±61.1、1196.75±104.4、1221.5±96.2、1330.25±55.1和1115±63.3、970±64.2、1069±67.8、1150.25±102.5U/L。其中3d、5d、7

7、d數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義，(P＜0.05)。1d數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學意義，(P＞0.05)ALT指標分別為911.75±61.9、1044.25±63.4、1191±190.4、1285.25±191和1096.25±97.7、1267.25±162.9、959±99.5、1051.5±110.5U/L。其中1d、3d、5d、7d數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。TB指標分別為4.05±1.34、7.53±1.8、8.73±0.26、

8、9.42±0.33和5.48±0.33、6.53±0.21、7.13±0.26、7.78±0.34U/L。其中1d、3d數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，5d、7d數(shù)據(jù)差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。ALB指標分別為21.75±1.7、20.75±1.7、20.5±2.1、15.75±2.2和22±1.8、21.5±0.58、21±0.71、19.5±0.74U/L。其中1d、3d、5d數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，7d