溶澡弧菌PCR檢測(cè)及SSCP在毒力株鑒定的應(yīng)用.pdf

1、本研究選擇gyrB基因?yàn)榘谢?，以溶藻弧菌種特異性區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物，該引物能將典型溶藻弧菌與其它弧菌或非弧菌細(xì)菌區(qū)分開(kāi)來(lái)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證該檢測(cè)技術(shù)的準(zhǔn)確性，進(jìn)行為期一年的實(shí)樣檢測(cè)。該P(yáng)CR從874株細(xì)菌里檢測(cè)出77株陽(yáng)性菌，經(jīng)過(guò)SSCP分析，該77株陽(yáng)性菌分屬于4個(gè)分子型，通過(guò)對(duì)不同分子型的陽(yáng)性菌株進(jìn)行抽樣測(cè)序，結(jié)果表明抽選的所有陽(yáng)性菌株的gyrB基因片段序列與溶藻弧菌的同源性最高，由此認(rèn)為均為溶藻弧菌，所以該P(yáng)CR檢測(cè)技術(shù)準(zhǔn)確率為1

2、00％?；趃yrB基因片段的SSCP分型，可將77株溶藻弧菌分為4個(gè)分子型：a、b、c和d型，而基于膠原蛋白酶基因片段的分型，可將77株溶藻弧菌分為13個(gè)分子型：A1、A2、A3、A4、B、C、D、E、F、G1、G2、H和I型，分辨率得到很大提高。其中A1型是優(yōu)勢(shì)分子型，占總數(shù)的48.1％。從南油分離的菌株的多態(tài)性明顯高于特呈和麻斜，25個(gè)菌株包含了11個(gè)分子型，其中A3、A4、E、G1和G2型，是南油所獨(dú)有的，A2型也主要分布于南油

3、。從麻斜分離的菌株的多念性也較為豐富，29個(gè)菌株可分出7個(gè)分子型，其中H和I型是麻斜獨(dú)有的。從特呈分離的菌株的多態(tài)性最低，23個(gè)菌株只包含4個(gè)分子型。除了D型主要分布于特呈外，其它三個(gè)分子型都普遍存在于三個(gè)養(yǎng)殖區(qū)。根據(jù)gyrB和膠原蛋白酶-SSCP型的組合將細(xì)菌分組，每個(gè)組合代表一種基因遺傳型，可分為15個(gè)遺傳型，然后每組隨機(jī)挑選若干菌株進(jìn)行致病性實(shí)驗(yàn)。發(fā)現(xiàn)溶藻弧菌的毒力與膠原蛋白酶-SSCP分型呈相關(guān)關(guān)系(r=0.438 p<0.01