BMP-2誘導低氧環(huán)境下BMSCs向軟骨表型分化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:探討B(tài)MP-2聯(lián)合低氧環(huán)境誘導BMSCs向成軟骨生成分化的可行性,并進一步研究其生物學機制。
   方法:體外培養(yǎng)4周齡健康清潔級雌性SD大鼠BMSCs,取第2代細胞根據(jù)培養(yǎng)條件不同將實驗分為4組:常氧對照組(A組)、常氧加BMP-2誘導液組(B組)、低氧對照組(C組)和低氧加BMP-2誘導液組(D組)。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)變化,阿利新藍染色檢測各組軟骨基質糖胺聚糖(glycosaminoglycans,GAG)分泌水

2、平,Western blot檢測細胞內(nèi)Ⅱ型膠原和低氧誘導因子1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)蛋白表達水平,RT-PCR檢測成軟骨、成骨以及低氧相關基因表達水平。
   結果:D組誘導21天,細胞變?yōu)轭悎A形,細胞密度明顯減少,細胞周邊呈陷窩樣,基質包裹細胞,而A、B和C組均未見上述典型變化。D組阿利新藍染色較其他組明顯深染,并隨誘導時間延長,藍染加深,21天時出現(xiàn)成片深染藍色,其他實驗組

3、各時間點僅見散在少量的淡染藍色。Western Blot檢測細胞內(nèi)Ⅱ型膠原蛋白表達水平D組較其他實驗組顯著增高(P<0.05),HIF-1α蛋白表達水平C、D組較A、B組顯著增高,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。RT-PCR檢測D組成軟骨分化相關指標COL2α1、Agg表達最高,而B組成骨分化相關指標COL1α1、ALP、RUNX2表達水平最高,C和D組低氧相關的指標HIF-1α較A和B組顯著增強(P<0.05)。
   結論

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