BMP4誘導人骨膜來源細胞成軟骨分化實驗研究.pdf

1、目的：
　　探討B(tài)MP4在體外培養(yǎng)誘導人骨膜來源細胞向軟骨細胞定向分化中的作用。
　　方法：
　　以小腿截肢患者脛骨骨膜組織為材料，采用組織塊法分離骨膜來源細胞，置于含10％胎牛血清的DMEM/F12完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學，流式細胞技術分析第3代骨膜來源細胞表面抗原(CD90和CD105)表達情況。實驗分為對照組，軟骨誘導液組和BMP4組，分別加入完全培養(yǎng)基，軟骨誘導液和含BMP4軟骨誘導液進行培養(yǎng)

2、，14-21天后采用甲苯胺藍染色和Ⅱ型膠原免疫組化染色檢測細胞的蛋白多糖和Ⅱ型膠原著色情況；定量PCR檢測Aggrecan、Ⅱ型膠原和SOX9mRNA的表達情況。臺盤藍染色細胞計數法檢測第3代、第9代骨膜來源細胞增殖情況及BMP4對骨膜來源細胞增殖的影響，并繪制細胞生長曲線圖。
　　結果：
　　1、骨膜來源細胞在體外培養(yǎng)條件形態(tài)呈成纖維細胞樣，細胞生長曲線證實骨膜來源細胞具有良好的增殖能力，第3代及第9代細胞增殖能力相似。<

3、br>　　2、流式細胞儀檢測證實細胞表面抗原CD90及CD105呈陽性表達。
　　3、組織化學及免疫組化染色檢測證實成軟骨誘導分化后細胞蛋白聚糖及Ⅱ型膠原呈陽性表達，細胞具有向軟骨細胞分化的能力。
　　4、甲苯胺藍染色及Ⅱ型膠原免疫組化染色檢測證實BMP4組及軟骨誘導液組蛋白聚糖及Ⅱ型膠原呈陽性表達，而對照組呈陰性表達。
　　5、定量PCR檢測顯示骨膜來源細胞經BMP4誘導后aggrecan、Ⅱ型膠原、SOX9mRNA

4、的表達明顯高于軟骨誘導液及對照組，差異有統計學意義(P<0.05)。
　　6、臺盤藍染色細胞計數檢測證實BMP4可以影響骨膜來源細胞增殖。
　　結論：
　　1、體外培養(yǎng)的骨膜來源細胞增殖能力強，具有向軟骨細胞分化的能力。
　　2、BMP4一定濃度下影響骨膜來源細胞增殖。
　　3、BMP4具有促進骨膜來源細胞向軟骨細胞分化的功能。
　　4、BMP4促進骨膜來源細胞向軟骨細胞分化與Smads信號通路密切相