抑制Runx2表達(dá)調(diào)控BMP2誘導(dǎo)的間充質(zhì)干細(xì)胞成軟骨及成骨分化.pdf

1、目的：利用腺病毒介導(dǎo)RNA干擾抑制成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子Runx2（Runt-related transcription factor2）的表達(dá)，研究其對(duì)骨形態(tài)發(fā)生蛋白2（bone morphogenetic protein2，BMP2）誘導(dǎo)間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cells，MSCs）成軟骨分化及成骨分化的影響，并初步探討相關(guān)機(jī)制。
　　方法：利用腺病毒Ad-GFP、Ad-BMP2、Ad-SiRunx2

2、感染C3H10T1/2細(xì)胞；共分4組：GFP組、BMP2組、BMP2+SiRunx2組和SiRunx2組。Alcian blue染色檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞基質(zhì)糖胺聚糖分泌；堿性磷酸酶染色檢測(cè)早期成骨標(biāo)志物堿性磷酸酶的表達(dá)，茜素紅染色檢測(cè)晚期成骨鈣鹽的沉積。RT-PCR檢測(cè)Runx2、早期成軟骨標(biāo)志物（Col2a1）、蛋白聚糖（Aggrecan）及晚期成軟骨標(biāo)志物（Col10a1）、成骨標(biāo)志物ALP及Ⅰ型膠原蛋白（Col1a1）mRNA表達(dá)水平

3、;Western blot檢測(cè)目的蛋白BMP2、Ⅱ型膠原（Col2a1）、X型膠原（Col10a1）及骨鈣蛋白(Osteocalcin OCN)的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：在BMP2誘導(dǎo)C3H10T1/2細(xì)胞成軟骨分化過(guò)程中，下調(diào)Runx2的表達(dá)可以增強(qiáng)Col2a1、Aggrecan及軟骨細(xì)胞外基質(zhì)糖胺聚糖的合成，抑制Col10a、Col1a1、ALP、OCN的合成，降低晚期成骨過(guò)程中鈣鹽的沉積。
　　結(jié)論：下調(diào)Runx2表達(dá)可