云芝液體發(fā)酵制備多肽的研究.pdf

1、云芝是一種珍稀的食藥用真菌，具有多種生物活性，但是目前的研究多集中在多糖的功能和活性上，對(duì)其小分子活性肽類物質(zhì)的研究尚未見(jiàn)有報(bào)道，為此，本文對(duì)云芝的液體深層發(fā)酵和多肽的提取進(jìn)行了研究，主要結(jié)論如下： 1.研究了液體發(fā)酵培養(yǎng)基中各種組成成分對(duì)云芝生物量的影響。通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)，最終確定云芝液體深層發(fā)酵最佳的培養(yǎng)基組合為蔗糖濃度4％、花生餅粉濃度1.5％、pH值4.2、KH2PO4 1.0％、MgSO4 0.5％、Ca2SO4

2、0.5％、肌醇0.01％，在此培養(yǎng)基組合條件下，云芝的生物量為1.83g/L。 2.研究了云芝液體發(fā)酵中各種培養(yǎng)條件對(duì)云芝生物量的影響。通過(guò)單因素和J下交試驗(yàn)，最終確定云芝液體深層發(fā)酵的最佳培養(yǎng)條件為培養(yǎng)溫度25℃、接種量15％、轉(zhuǎn)速200rpm、裝液量40％、發(fā)酵時(shí)間6d，在此培養(yǎng)條件下，云芝的生物量為1.95g/L。 3.首次采用超高壓提取技術(shù)提取云芝菌絲體中活性肽類成分，確定了超高壓提取肽類成分的最佳工藝參數(shù)為：提

3、取壓力400MPa、保壓2min、料液比1：5、高壓處理前浸泡2.5h，在此條件下，活性肽的得率為3.23％，對(duì)羥基自由基的抑制率為62.25％。 4.從三種不同蛋白酶中篩選出中性蛋白酶為云芝菌絲體水解的最佳用酶，通過(guò)單因素和正交試驗(yàn)確定最佳的水解工藝參數(shù)為：酶解pH為8.0、溫度50℃、酶解時(shí)間3h、底物濃度為10％、加酶量為1.0mg/g，在此條件下水解度為33.28％。 5.用活性炭對(duì)酶解液進(jìn)行脫色處理，以酶解液脫

4、色率，肽損失率和溶液活性物質(zhì)的損失率考察脫色效果，得出活性炭對(duì)酶水解產(chǎn)物脫色的適宜條件：活性炭用量3％，pH值為4，脫色溫度50℃，吸附時(shí)間30min，此時(shí)DE為86.8％，LP為6.28％，IP為70.36％。 6.將酶解液通過(guò)10kDa、5kDa、3kDa截流分子量的超濾膜，測(cè)定不同分子量段肽溶液的肽得率和清除羥基自由基的IC50值，結(jié)果表明：分子量在3kDa以內(nèi)的肽得率最高，達(dá)到38.67％，清除羥基自由基的能力最強(qiáng)，IC