銀屑病表皮角質形成細胞糖皮質激素受體核質轉運障礙的機制與功能研究.pdf

1、[研究背景]
　　 銀屑病是一種常見的多基因遺傳、多環(huán)境因素誘導的慢性炎癥性增殖性皮膚病。目前認為銀屑病不僅僅只是一種皮膚疾病，因為銀屑病患者往往伴有糖尿病、高血壓、冠心病、肥胖、抑郁和代謝綜合征等系統(tǒng)性疾病，所以，銀屑病現已成為嚴重影響廣大人民群眾身心健康的復雜性疾病之一。
　　 眾所周知，外用糖皮質激素制劑在治療銀屑病中應用最廣泛，是銀屑病治療的一線藥物，其對銀屑病皮損的清除十分迅速有效。糖皮質激素(Glucocor

2、ticoid，GC)的作用如此強大，主要是通過其受體--糖皮質激素受體(Glucocorticoidreceptor，GR)來實現的。GR屬于核受體家族，廣泛分布于幾乎所有細胞上。
　　 大量研究表明GR能夠在細胞核和細胞漿之間穿梭。在沒有激素的情況下，GR主要存在于細胞胞漿中，與分子伴侶和其他蛋白組成多蛋白復合物。GC與GR結合后誘導多蛋白復合物發(fā)生構象變化，促使GR從復合物中解離，并轉位至細胞核中。根據細胞類型的不同，未轉化

3、的GR可以位于胞漿或胞核中。一旦與配體結合，未轉化的GR即通過核轉錄因子轉位進入細胞核，細胞核中GR與特異性DNA序列糖皮質激素反應元件結合，調節(jié)靶基因的轉錄。
　　 我們的初步研究表明，正常人角質形成細胞中GR位于細胞核中，而銀屑病角質形成細胞中GR則位于細胞漿中，即銀屑病角質形成細胞中GR發(fā)生核質轉運障礙。哪些因素導致了GR核質轉運障礙的發(fā)生?GR核質轉運障礙的機制和意義是什么?這些問題促使我們通過體外細胞培養(yǎng)和建立銀屑病小

4、鼠模型對銀屑病皮損角質形成細胞中GR的表達和功能進行深入的綜合分析，探討GR在銀屑病發(fā)生發(fā)展過程中的變化及其在表皮角質形成細胞增殖過程中的作用。
　　 [目的]
　　 明確在銀屑病角質形成細胞中，存在糖皮質激素受體的核質轉運障礙；闡明銀屑病角質形成細胞糖皮質激素受體核質轉運障礙的原因以及可能的信號傳導通路的作用；明確導致銀屑病角質形成細胞糖皮質激素受體核質轉運障礙的機制，發(fā)現新的與糖皮質激素受體核質轉運有關的分子及其作用

5、；闡明銀屑病角質形成細胞核質轉運障礙的意義，從而通過促進糖皮質激素受體的核轉位，發(fā)現治療銀屑病的新方法。
　　 [方法]
　　 第一部分：間接免疫熒光法檢測糖皮質激素受體在正常表皮和銀屑病皮損的表達和定位；分離和培養(yǎng)正常人和銀屑病患者表皮角質形成細胞，以間接免疫熒光法檢測糖皮質激素受體在細胞中的定位；以WesternBlot法比較糖皮質激素受體在正常人和銀屑病患者表皮角質形成細胞中表達；ELISA法檢測銀屑病患者外周血中

6、促腎上腺皮質激素和皮質醇的水平；將細胞因子(如VEGF16s和IFN-γ等)與體外培養(yǎng)的角質形成細胞共孵育，間接免疫熒光法檢測對糖皮質激素受體的核質分布影響。
　　 第二部分：分離和培養(yǎng)正常人和銀屑病患者表皮角質形成細胞，與GSK-3、p53和微管蛋白抑制劑共培養(yǎng)，間接免疫熒光法檢測上述因素對糖皮質激素受體核轉位的影響；以外源性細胞因子刺激培養(yǎng)的正常人和銀屑病角質形成細胞，間接免疫熒光法檢測對糖皮質激素受體的影響。
　　

7、 第三部分：外用咪喹莫特誘導Balb/c小鼠產生銀屑病樣皮損；靜脈注射IL-13和微管抑制劑vincristine，觀察對咪喹莫特誘導銀屑病樣皮損的影響；對小鼠標本進行Masson三染，評價IL-13和vincristine對咪喹莫特誘導小鼠的影響。
　　 [結果]
　　 一、糖皮質激素受體在銀屑病表皮和正常表皮的定位和定量表達：
　　 1.糖皮質激素受體強烈表達于銀屑病表皮和正常表皮除角質層外的各層細胞；

8、>　　 2.糖皮質激素受體在銀屑病表皮和正常表皮細胞內的分布是不同的：糖皮質激素受體位于銀屑病表皮細胞的胞漿中，而在正常表皮細胞中卻位于胞核內；
　　 3.體外培養(yǎng)的銀屑病和正常角質形成細胞內糖皮質激素受體的分布與組織免疫熒光結果一致：糖皮質激素受體位于銀屑病角質形成細胞的胞漿中，而位于正常角質形成細胞的胞核內；
　　 4.銀屑病與正常角質形成細胞之間糖皮質激素受體的表達量無差異；
　　 二、銀屑病與正常角質形

9、成細胞糖皮質激素受體核轉運影響因素：
　　 1.銀屑病患者與正常對照之間外周血促腎上腺皮質激素和皮質醇水平無差異；
　　 2.VEGF165和IFN-γ可誘導正常角質形成細胞糖皮質激素受體核轉運障礙；
　　 3.地塞米松可逆轉VEGF165和IFN-γ誘導的糖皮質激素受體核轉運障礙；
　　 4.內皮素-1、肝細胞生長因子、轉化生長因子、白介素10、白介素13、白介素17、血小板源性生長因子AA/AB/BB

10、對正常角質形成細胞糖皮質激素受體核質轉運無影響；
　　 5.ATP水平對正常角質形成細胞糖皮質激素受體的核質轉運無影響。
　　 三、銀屑病角質形成細胞糖皮質激素受體核質轉運障礙機制：
　　 1.p53抑制劑可抑制VEGF165和IFN-γ誘導的糖皮質激素受體核質轉運障礙；
　　 2.微管抑制劑vincristine可抑制糖皮質激素受體的核攝?。?br>　　 3.GSK-3抑制劑不能抑制糖皮質激素受體的核

11、攝??；
　　 4.地塞米松促進銀屑病表皮角質形成細胞胞漿糖皮質激素受體進入細胞核內；
　　 5.IL-13，PDGF-AA、PDGF-AB和PDGF-BB可促進銀屑病表皮角質形成細胞糖皮質激素受體進入細胞核內，而ET-1、HGF，TGF-β1、IL-10和IL-17不能促進糖皮質激素受體進入細胞核內；
　　 6.突然撤去地塞米松可誘導正常角質形成細胞糖皮質激素受體聚集在胞漿中。
　　 四、IL-13和微管

12、抑制劑對瞇喹莫特誘導的小鼠銀屑病模型的影響：
　　 1.咪喹莫特誘導的Balb/c小鼠模型具有銀屑病的主要特征，包括表皮過度增殖肥厚、炎癥細胞浸潤和真皮微血管增生；
　　 2.IL-13可減輕咪喹莫特誘導小鼠的紅斑、鱗屑、表皮厚度和浸潤炎癥細胞的數目；
　　 3.微管抑制劑可加重咪喹莫特誘導小鼠的紅斑、鱗屑和微血管數目。
　　 [結論]
　　 一、銀屑病角質形成細胞糖皮質激素受體發(fā)生了核質轉運障礙

13、；
　　 二、銀屑病角質形成細胞糖皮質激素受體發(fā)生的核質轉運障礙與體內促腎上腺皮質激素和皮質醇水平無關；
　　 三、VEGF165和IFN-γ可誘導正常角質形成細胞糖皮質激素受體發(fā)生核質轉運障礙，而地塞米松可逆轉此誘導效應；
　　 四、角質形成細胞糖皮質激素受體發(fā)生核質轉運障礙是非APT依賴的；
　　 五、VEGF165和IFN-γ誘導的糖皮質激素受體核質轉運障礙需要p53參與；
　　 六、微管介

14、導糖皮質激素受體的核攝取，p53介導糖皮質激素受體的核輸出，而GSK-3抑制劑不能抑制糖皮質激素受體的核轉運；
　　 七、地塞米松促進銀屑病角質形成細胞糖皮質激素受體核轉運需要微管參與；
　　 八、IL-13、PDGF-AA、PDGF-AB和PDGF-BB可促進銀屑病表皮角質形成細胞糖皮質激素受體進入細胞核內；
　　 九、突然撤去地塞米松可誘導正常角質形成細胞糖皮質激素受體聚集于胞漿；
　　 十、IL-1