骨肉瘤細(xì)胞特異結(jié)合肽及腫瘤抗原模擬位的研究.pdf

1、該研究以骨肉瘤細(xì)胞為靶篩選噬菌體12肽庫,以尋求能與骨肉瘤細(xì)胞特異結(jié)合的小分子短肽,為骨肉瘤的靶向治療提供有用的信息.該研究還以能與骨肉瘤細(xì)胞特異結(jié)合的噬菌體克隆為靶篩選噬菌體環(huán)7肽庫,以期得到骨肉瘤細(xì)胞表面位點(diǎn)的模擬序列,對骨肉瘤細(xì)胞表面相關(guān)抗原的模擬結(jié)構(gòu)進(jìn)行了初步的探索.該研究包括以下兩個(gè)方面:1、骨肉瘤細(xì)胞特異結(jié)合肽的研究:首先以骨肉瘤細(xì)胞為靶子,對噬菌體隨機(jī)12肽庫進(jìn)行篩選,采用差減篩選(subtraction screenin

2、g)的方法,用成骨細(xì)胞作為吸附細(xì)胞(absorber cell)以除去非特異結(jié)合的噬菌體,以期得到可與骨肉瘤細(xì)胞特異結(jié)合的小分子短肽.經(jīng)過三輪篩選后,隨機(jī)挑選20個(gè)噬菌體克隆對其進(jìn)行鑒定.作者用細(xì)胞ELISA和細(xì)胞免疫組化兩種方法鑒定篩選出的噬菌體克隆.然后將陽性克隆進(jìn)行測序,推導(dǎo)其氨基酸序列.利用細(xì)胞ELISA的方法鑒定,其中有9個(gè)克隆顯示可與骨肉瘤細(xì)胞有較強(qiáng)的結(jié)合.該研究成功地利用噬菌體表面呈現(xiàn)技術(shù)篩選出骨肉瘤細(xì)胞特異性結(jié)合短肽,為

3、骨肉瘤的靶向治療的進(jìn)一步研究奠定基礎(chǔ).2、骨肉瘤細(xì)胞表面相關(guān)抗原模擬肽的初步篩選:為獲得骨肉瘤細(xì)胞表面分子模擬肽,該研究建立了生物素標(biāo)記噬菌體體系.作者用與骨肉瘤細(xì)胞特異結(jié)合的12肽No.14噬菌體克隆為靶分子篩選噬菌體環(huán)7肽庫,并且利用骨肉瘤細(xì)胞裂解液作為配基洗脫,經(jīng)過三輪篩選后,挑取20個(gè)克隆用生物素-親和素系統(tǒng)ELISA進(jìn)行了鑒定.該研究采用特殊的篩選方式,即以噬菌體克隆為靶分子,直接對噬菌體肽庫進(jìn)行親和性篩選,省略了肽合成或純化