苦瓜蛋白的分離純化及其抗腫瘤作用的研究.pdf

1、目的:
　　 惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類健康和社會(huì)發(fā)展的疾病之一，近年來其發(fā)生率和死亡率呈逐年上升，盡管目前在腫瘤治療方面取得很大進(jìn)展，但仍以藥物化療和放療為主，這些治療方法在殺死腫瘤細(xì)胞的同時(shí)對(duì)機(jī)體正常細(xì)胞和免疫系統(tǒng)也產(chǎn)生了嚴(yán)重?fù)p傷。近年來，從天然植物中尋找新的抗腫瘤藥物成為許多研究者的目標(biāo)。我們研究從苦瓜種子中純化得到具有活性的苦瓜蛋白，并對(duì)其抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討。
　　 方法:
　　 1.將去殼苦瓜種子

2、運(yùn)用丙酮分級(jí)沉淀法制備苦瓜蛋白粗提物，采用強(qiáng)陽離子交換層析柱(SP Sepharose High Performance)和G-75凝膠過濾分離純化，純化產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE鑒定分子量和純度，質(zhì)譜儀鑒定蛋白成分。
　　 2.將純化的苦瓜蛋白作用于k562、U937細(xì)胞株，采用cck-8法研究其生長抑制作用，HDAC試劑盒和RT-PCR檢測(cè)對(duì)腫瘤細(xì)胞HDAC活性和HDAC1基因表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1

3、.經(jīng)強(qiáng)陽離子交換和G-75凝膠過濾后得到蛋白組分經(jīng)質(zhì)譜鑒定為α-MMC，分子量均在29kDa左右。
　　 2.α-MMC對(duì)K562和U937細(xì)胞株具有抑制作用，10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml和50ug/ml的苦瓜蛋白作用K562細(xì)胞48小時(shí)的抑制率分別為22.1％、53.4％、60.1％、74.3％和85.5％，10ug/ml、20ug/ml、30ug/ml、40ug/ml和50ug/ml的苦瓜蛋

4、白作用U937細(xì)胞48小時(shí)的抑制率分別為15.6％，34.9％、42.3％、48.1％和55.9％。
　　 3.20ug/ml和40ug/mlα-MMC作用K562細(xì)胞株48h小時(shí)后，HDAC活性分別下降38.5％和46.2％。
　　 4.苦瓜蛋白作用K562細(xì)胞株24h后，HDAC1基因的mRNA下調(diào)27.2％(P＜0.05)，HDAC2基因的mRNA下調(diào)11.0％(P＜0.05)，HDAC3基因的mRNA上調(diào)1.4％