前列腺癌PC-3多西紫杉醇耐藥細(xì)胞株的蛋白組學(xué)分析.pdf

1、研究背景:
　　 前列腺癌是西方歐美國(guó)家男性中最常見的腫瘤，也是男性腫瘤中的第二大致死病因。盡管前列腺癌根治術(shù)或局部放療具有一定的可行性，但是經(jīng)過治療后，大部分病人都會(huì)出現(xiàn)前列腺癌的復(fù)發(fā)。雄激素去除治療仍是激素非依賴性前列腺癌，特別是伴有轉(zhuǎn)移灶的前列腺癌患者的治療標(biāo)準(zhǔn)，但是，其也無(wú)法達(dá)到治愈的目的。盡管絕大部分前列腺癌患者在接受去勢(shì)治療后，會(huì)出現(xiàn)臨床癥狀的緩解與改善，但是最終經(jīng)過大約18-24月的治療周期后進(jìn)展為雄激素非依賴性.

2、多西紫杉醇作為紫杉醇類藥物家族的一員，具有抗腫瘤的藥理作用，并作為單獨(dú)藥物或者聯(lián)合用藥廣泛的應(yīng)用于晚期前列腺癌的治療。然而，藥物耐藥性的出現(xiàn)是臨床上非常普遍的現(xiàn)象，伴隨著前列腺癌激素非依賴的產(chǎn)生，多西紫杉醇耐藥性也成為了最常見的結(jié)局?；诖耍瑸榱烁又庇^的從蛋白質(zhì)水平上認(rèn)識(shí)多西紫杉醇對(duì)前列腺癌細(xì)胞的作用機(jī)制，我們培養(yǎng)了前列腺癌激素非依賴PC-3細(xì)胞株，誘導(dǎo)其對(duì)多西紫杉醇耐藥，然后對(duì)耐藥株膜蛋白進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析，以期發(fā)現(xiàn)與前列腺癌PC-

3、3多西紫杉醇耐藥高度相關(guān)的蛋白質(zhì)。
　　 目的:
　　 本研究通過利用前列腺癌PC-3細(xì)胞系誘導(dǎo)出多西紫杉醇耐藥細(xì)胞株P(guān)C-3R，通過比較前列腺癌PC-3細(xì)胞株對(duì)多西紫杉醇(docetaxel)耐藥前后的細(xì)胞總蛋白質(zhì)的差異性表達(dá)，來分析前列腺癌PC-3細(xì)胞株對(duì)多西紫杉醇耐藥的產(chǎn)生機(jī)制，以期指導(dǎo)臨床前列腺癌患者激素非依賴階段的藥物治療。
　　 方法:
　　 體外通過逐步增加Docetaxel劑量(dose

4、escalation)的方法建立PC-3細(xì)胞的多西紫杉醇耐藥株P(guān)C-3R。利用雙向熒光差異凝膠電泳(DIGE)技術(shù)定量比較PC-3細(xì)胞多西紫杉醇敏感株與耐藥株的蛋白質(zhì)圖譜的差異性表達(dá)，并將表達(dá)差異倍數(shù)大于2倍的位點(diǎn)定于為差異位點(diǎn)。利用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜技術(shù)(MALDI-TOF/TOF-MS)對(duì)差異位點(diǎn)進(jìn)行蛋白質(zhì)成分鑒定。
　　 結(jié)果:
　　 ①多西紫杉醇耐藥細(xì)胞株P(guān)C-3R的Docetaxel IC(50)

5、為敏感株P(guān)C-3的7倍。
　　 ②利用DIGE結(jié)合MALDI-TOF/TOF-MS質(zhì)譜分析技術(shù)，PC-3細(xì)胞多西紫杉醇耐藥株較敏感株成功分離出49種差異蛋白質(zhì)，其中29種表達(dá)上調(diào)，20種表達(dá)下調(diào)。
　　 ③分離出的差異蛋白質(zhì)中:ATP合酶（ATP synthase）、半乳糖凝集素-1(Galectin-1)等參與腫瘤血管的生成;鈣網(wǎng)蛋白(Calreticulin)、組織蛋白D(Cathepsin D)、絲切蛋白(Cofi

6、lin-1)參與腫瘤的轉(zhuǎn)移;葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(78kDa glucose-regulated protein(GRP78))、微管相關(guān)蛋白(Microtubule-associated protein-6)等參與腫瘤的耐藥性調(diào)節(jié)。
　　 結(jié)論:
　　 人前列腺癌PC-3細(xì)胞株多西紫杉醇耐藥前后存在蛋白質(zhì)的差異性表達(dá)，且部分差異性表達(dá)的蛋白質(zhì)參與了腫瘤的生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及耐藥性形成，從而為進(jìn)一步了解及研究前列腺癌轉(zhuǎn)移及耐藥性形