小鼠酒精性脂肪肝中線粒體生物合成的損傷.pdf

1、近年來(lái)我國(guó)由酒精所致的肝損害也呈逐年上升趨勢(shì)，酒精成為繼病毒后導(dǎo)致肝臟損害的第二大病因。國(guó)內(nèi)外關(guān)于酒精性肝病的研究日益增多，但其研究熱點(diǎn)大多集中在酒精本身或其代謝產(chǎn)物，對(duì)肝細(xì)胞的直接毒性作用，及營(yíng)養(yǎng)失調(diào)、脂質(zhì)代謝異常、脂質(zhì)過(guò)氧化等變化在酒精性肝病發(fā)病學(xué)中的作用。肝臟線粒體是酒精代謝的主要場(chǎng)所，也是酒精肝毒性損傷的主要細(xì)胞器。線粒體的生物合成是線粒體損傷修復(fù)的重要步驟，但對(duì)于酒精性脂肪肝中線粒體的生物合成情況卻鮮見(jiàn)報(bào)道，線粒體生物合成的損

2、傷在酒精性脂肪肝發(fā)生中的作用機(jī)制尚不清楚。
　　 目的
　　 通過(guò)建立小鼠酒精性脂肪肝模型，檢測(cè)小鼠酒精性脂肪肝中肝臟線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化，分析線粒體生物合成相關(guān)的基因的表達(dá)，研究酒精性脂肪肝中線粒體生物合成能力的變化，以進(jìn)一步闡明酒精性脂肪肝中線粒體損傷的機(jī)制，為酒精性脂肪肝的防治尋求新的途徑。
　　 材料與方法
　　 雄性C57BL/6小鼠30只，體重(22～24)g，隨機(jī)分為對(duì)照組和酒精性脂防肝模型

3、組，每組15只。根據(jù)Liber-Decarli模型建立小鼠酒精性脂肪肝模型。模型組小鼠給予酒精液體飼料，對(duì)照組給予無(wú)酒精液體飼料。飼養(yǎng)4周后，麻醉后心臟取血，檢測(cè)AST，ALT，TG。采血后取肝組織做石蠟切片HE染色，結(jié)合冰凍切片油紅染色觀察肝脂肪變性程度及肝細(xì)胞形態(tài)變化情況。透射電鏡觀察對(duì)照組、模型組肝細(xì)胞內(nèi)線粒體、脂滴產(chǎn)生等超微結(jié)構(gòu)改變。運(yùn)用定量PCR技術(shù)檢測(cè)線粒體DNA，PGC-1a，NRF-1，TFAM，PPAR-a，CPT-I

4、在各組小鼠肝組織中的表達(dá)情況。
　　 所得數(shù)據(jù)使用SPSS12.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用(x±s)表示，組間兩兩比較采用t檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Pearson檢驗(yàn)，以a=0.05作為檢驗(yàn)水準(zhǔn)。
　　 結(jié)果：
　　 1與對(duì)照組相比，模型組小鼠血清ALT，TG，肝臟TG明顯升高(P<0.01，P<0.05，P<0.01)，AST變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；肝臟指數(shù)增大(P<0.01)，肉眼觀察肝臟體積增大，邊緣變鈍，呈黃

5、褐色，色澤晦暗；HE染色顯示大于30％的肝臟細(xì)胞出現(xiàn)脂肪變性；油紅染色中肝組織內(nèi)有大量脂滴形成；提示小鼠酒精性脂肪肝模型建立成功。
　　 2與對(duì)照組相比：模型組小鼠肝細(xì)胞線粒體超微結(jié)構(gòu)改變：線粒體腫脹明顯，線粒體膜融合，基質(zhì)電子密度下降，嵴斷裂或消失；線粒體數(shù)量減少(P<0.01)；脂肪酸β氧化總活性降低(P<0.01)；線粒體DNA表達(dá)水平降低(P<0.05)；調(diào)節(jié)線粒體生成的基因PGC-1a，NRF-1，TFAM的mRNA表

6、達(dá)水平降低(P<0.05，P<0.05，P<0.01)；調(diào)節(jié)脂肪酸氧化的基因PPAR-a，CPT-I的mRNA表達(dá)水平降低(P<0.01，P<0.05)。
　　 3肝臟中線粒體DNA的表達(dá)水平與肝臟中甘油三酯，肝臟指數(shù)，脂肪酸β-氧化總活性均呈負(fù)相關(guān)(均 P<0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1酒精性脂肪肝中，小鼠肝臟線粒體的超微結(jié)構(gòu)受到損傷。
　　 2酒精性脂肪肝中，調(diào)節(jié)線粒體生物合成有關(guān)的基因PGC-