外源性NGF對大鼠腦出血的有效性研究.pdf

1、第一部分，Ⅶ型膠原酶誘導(dǎo)大鼠腦出血模型的制備
　　目的:探討利用Ⅶ型膠原酶制作大鼠腦出血模型,使之成為一種穩(wěn)定有效,可重復(fù)的腦出血模型方法。
　　方法:雄性SD大鼠48只隨機(jī)分為實(shí)驗組和對照組,將等體積Ⅶ型膠原酶和無菌生理鹽水分別注入實(shí)驗組和對照組大鼠尾殼核。通過觀察兩組大鼠在第1、3和7天不同時間點(diǎn)的神經(jīng)功能缺損變化,最后處死后腦部尾殼核形成的血腫體積大小以及腦組織化學(xué)改變。
　　結(jié)果:實(shí)驗組大鼠都有神經(jīng)功能缺損明顯

2、,尾殼核有明顯出血灶,而對照組神經(jīng)體征不明顯,尾殼核未見明顯出血,兩組相比較具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)。同樣,切片HE染色中可見穿刺道大量紅細(xì)胞存在,血腫周圍細(xì)胞水腫明顯。而對照組僅見穿刺針道有少許血細(xì)胞存在。
　　結(jié)論:Ⅶ型膠原酶制作大鼠腦出血模型是一種成功的穩(wěn)定的可重復(fù)的方法。
　　第二部分，外源性NGF對大鼠腦出血的有效性研究
　　方法:將SD大鼠隨機(jī)分成三組,即假手術(shù)組、對照組和NGF組。對照組和NGF

3、組均按第一部分造模方法所述以Ⅶ型膠原酶制備腦出血模型,假手術(shù)組只將給予頭皮切開,不做任何處理便縫合皮膚。NGF組是經(jīng)孔給予2μl混有300uNGF的生理鹽水緩慢注入,對照組則給予2μl無菌生理鹽水,假手術(shù)組不給予NGF或無菌生理鹽水。術(shù)畢觀察三組大鼠神經(jīng)功能缺損變化,按第1、3和7天三個時間點(diǎn)處死大鼠,處死前給予BrdU抗體按50mg/kg行腹腔注射,4％多聚甲醛前固定鼠腦,取出腦組織后再以4%多聚甲醛后固定,20%和30%蔗糖液脫水,

4、錫紙包裹后凍存于-80℃冰箱中。再做10μm厚的冰凍切片,將冰凍切片行免疫組化檢測,在光學(xué)顯微鏡下計數(shù)新生神經(jīng)元細(xì)胞(Nestin抗體標(biāo)記)數(shù)目、新生血管數(shù)目(VEGF抗體標(biāo)記)以及含BrdU的增殖神經(jīng)元的數(shù)目,最后將各組數(shù)據(jù)性統(tǒng)計學(xué)分析。
　　結(jié)果:假手術(shù)組神經(jīng)功能缺損評分前后均為0分;對照組造模后有明顯神經(jīng)功能缺損,但后期神經(jīng)功能恢復(fù)緩慢;NGF組在給予NGF后神經(jīng)功能缺損評分有改善,第7天時間點(diǎn)改善最明顯,統(tǒng)計學(xué)分析有意義(